| 1. 难度：中等 | |
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下列关于基因工程的叙述，正确的是( ) A. 构建表达载体时需要在目的基因前加上起始密码子 B. 农杆菌转化法可以将目的基因随机插入受体细胞的染色体DNA上 C. 标记基因中不能有限制酶的识别位点以防止其被破坏而失去作用 D. 导入人胰岛素基因的大肠杆菌可直接生产出有活性的人胰岛素
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| 2. 难度：中等 | |
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科学家在某种植物中找到了抗枯萎的基因,并以质粒为运载体，采用转基因方法培育了抗枯萎病的金茶花新品种。下列有关说法正确的是 A. 基因工程育种只能在同种生物中进行 B. 质粒是能自我复制的小型细胞器，因此适合做运载体 C. 通过该方法获得的抗病金茶花,将来产生的配子不一定含抗病基因 D. 抗枯萎基因最终整合到植物的染色体组中，该技术应用的原理是染色体变异
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| 3. 难度：中等 | |
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图1表示DNA的平面结构示意图，图2表示某种限制酶的识别序列和作用位点，下列相关说法正确的是
A.图1中a所示部位即图2中箭头所示部位 B.图2所示的DNA片段被限制酶切割后获得的末端形式与图1下端相同 C.E▪co1iDNA连接酶可以将两个图1所示结构连接成为一个DNA片段 D.基因工程的载体必须具有图2所示的碱基序列
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| 4. 难度：中等 | |
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如图为某植物细胞一个DNA分子中a、b、c三个基因的分布状况，图中 Ⅰ、Ⅱ为无遗传效应的序列。有关叙述正确的是
A.在每个植物细胞中，a、b、c基因都会表达出相应蛋白质 B.a、b互为非等位基因，在亲子代间传递时可自由组合 C.b中碱基对若发生了增添、缺失或替换，则发生了基因突变，但性状不一定改变 D.基因在染色体上呈线性排列，基因的首、尾端存在起始密码子和终止密码子
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| 5. 难度：中等 | |
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下图表示利用基因工程生产胰岛素的三种途径，据图判断下列说法正确的是
A. 催化过程①的DNA连接酶的作用是促使碱基之间形成氢键 B. 三种方法直接得到的胰岛素都具有生物活性 C. 导入受体细胞C使用Ca2+处理使其吸收周围的DNA分子 D. 利用显微注射的方法将目的基因导入受体细胞A即乳腺细胞
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| 6. 难度：中等 | |
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下列叙述正确共几项（ ） ①限制性内切酶的特点是识别特定的核苷酸序列和具有特定的酶切位点 ②上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛，可以想象这头牛发生了基因突变 ③根据mRNA的信息推出并获取目的基因的方法是用DNA探针测出目的基因 ④转基因抗虫棉的生产过程中不需要用到的工具是噬菌体 ⑤可以作目的基因“分子运输车”的是天然质粒 ⑥在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是将目的基因导入受体细胞 ⑦培育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体 ⑧基因工程常用细菌等原核生物作受体细胞的原因包括繁殖速度快、遗传物质相对较少、多为单细胞，操作简便 A.三 B.四 C.五 D.六
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| 7. 难度：中等 | |
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下列哪项不是蛋白质工程的研究内容 A. 分析蛋白质分子的精细结构 B. 分析氨基酸的化学组成 C. 对蛋白质进行有目的的改造 D. 按照人的意愿将天然蛋白质改造成新的蛋白质
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| 8. 难度：困难 | |
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“筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列关于筛选的叙述中正确的有几项( ) ①基因工程中用同种限制性核酸内切酶切割运载体和目的基因，酶切产物用DNA连接酶连接，为了保证成功率，需将获得的产物筛选后导入受体细胞 ②单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第一次筛选出的是杂交瘤细胞 ③单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第二次筛选出的是针对目标抗原的抗体检验为阳性的杂交瘤细胞 ④为了快速繁殖无子西瓜，需筛选出特定染色体组数的体细胞才能进行组织培养 A.②③ B.①④ C.③④ D.①②
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| 9. 难度：中等 | |
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ch1L基因是蓝藻拟核DNA上控制叶绿素合成的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞。技术路线如下图所示，对此描述错误的是
A.ch1L基因的编码区是连续不间断的 B.①②过程应使用同一种DNA限制性内切酶 C.①②过程都要使用DNA连接酶 D.若操作成功，可用含红霉素培养基筛选出该变异株
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| 10. 难度：中等 | |
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人们试图利用基因工程的方法，用乙种生物生产甲种生物的一种蛋白质。生产流程是：甲生物的蛋白质→mRNA A. ①过程需要的酶是逆转录酶，原料是A、U、G、C B. ④过程用的原料和工具中不含有A、U、G、C C. 质粒一般存在于原核生物细菌中，真核生物酵母菌也具有 D. ②要用限制酶切断质粒DNA，目的基因导入乙细胞后一定会表达甲生物的蛋白质
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| 11. 难度：中等 | |
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上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带人白蛋白的转基因牛，他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍。标志着我国转基因研究向产业化的目标又迈进了一大步。下列有关的叙述中，正确的是 A. 所谓“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 B. 转基因动物是指体细胞中出现了新基因的动物 C. 人们只在转基因牛的乳汁中获取人白蛋白，是因为只在转基因牛的乳腺细胞中才有人白蛋白基因 D. 运用基因工程技术让牛合成人白蛋白，该技术将导致定向变异
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| 12. 难度：简单 | |
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下列有关细胞工程的叙述，正确的是（ ） A.植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备过程中都需要对融合后的细胞进行筛选 B.植物体细胞杂交就是指不同种植物原生质体融合的过程，原理是膜的流动性 C.植物细胞在组织培养过程中染色体数目始终保持不变 D.经核移植培育出的新个体只具有一个亲本的遗传性状
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| 13. 难度：简单 | |
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玉米的PEPC酶固定CO2的能力较水稻的强60倍。我国科学家正致力于将玉米的PEPC基因导入水稻中，以提高水稻产量。下列各项对此研究的分析中正确的是（ ） A. 通常采用显微注射法将PEPC基因导入水稻细胞 B. 该技术的核心步骤是构建玉米PEPC基因表达载体 C. 在受体细胞中检测到PEPC酶则意味着此项研究取得成功 D. 利用细胞培养技术将转基因水稻细胞培育成植株
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| 14. 难度：简单 | |||||||||||||||||||||
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下列有关细胞工程技术原理及目的的叙述，错误的是
A. ① B. ② C. ③ D. ④
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| 15. 难度：中等 | |
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如图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析错误的是
A.①过程需用纤维素酶和果胶酶的混合物处理 B.②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变 C.③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能 D.④过程需用适宜配比的生长素和细胞分裂素处理
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| 16. 难度：中等 | |
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下图表示植物组织培养过程。据图分析下列叙述正确的是（ ）
A.②试管的培养基中含有植物生长调节剂，不含有有机物 B.③试管中的细胞能进行减数分裂 C.调节④培养基中植物生长调节剂的比例可诱导产生不同的植物器官 D.⑤植株根尖细胞的全能性比①植株根尖细胞的强
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| 17. 难度：中等 | |
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以下为植物体细胞杂交技术流程图，其中甲和乙分别表示两种二倍体植物细胞，所含有的染色体组分别是AA和BB。据图分析正确的是 （ ）
A.图中①过程通常用胰蛋白酶作用，目的是获得原生质体 B.过程②常使用聚乙二醇作为诱导剂 C.经过②和③过程形成的c细胞的染色体组一定为AABB D.该技术流程的目的是获得杂种细胞，优点是克服远缘杂交不亲和障碍
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| 18. 难度：中等 | |
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犬细小病毒（CPV）单克隆抗体（Cpv McAb）可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制，进而杀灭幼犬体内病毒。下列相关叙述，错误的是（ ） A.在获得能分泌 Cpv McAb 的杂交瘤细胞的过程中需进行一次筛选 B.给幼犬注射 CPV 后，CPV 的抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫反应 C.在 Cpv McAb 的制备过程中用到了动物细胞培养和动物细胞融合技术 D.对杂交细胞培养时，需要无菌无毒环境，且温度、气体环境等条件要适宜
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| 19. 难度：困难 | |
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下图是一种“生物导弹”的作用原理示意图，没有与肿瘤细胞结合的“生物导弹”一段时间后被机体清除。阿霉素是一种抗肿瘤药，可抑制DNA和RNA的合成，对正常细胞也有一定毒性。下列说法不正确的是
A.单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的 B.活化阿霉素能抑制细胞中的DNA复制和转录过程 C.在治疗中，应先注射非活化磷酸阿霉素再注射生物导弹 D.单克隆抗体特异性强，能减轻阿霉素对正常细胞的伤害
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| 20. 难度：中等 | |
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如图所示为动物细胞培养过程中，动物细胞增殖情况的变化曲线（图中B、D两点表示经处理或筛选后继续培养），相关说法不正确的是
A.OA段的培养称为原代培养，C点细胞大约增殖60代指该细胞已传代培养60代 B.AB段可能发生了接触抑制现象，需要用胰蛋白酶等处理 C.CD段细胞增殖缓慢，以至于完全停止，此时部分细胞的核型可能会发生改变 D.制备单克隆抗体时，可选取图中D点的细胞与B淋巴细胞融合形成杂交细胞
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| 21. 难度：中等 | |
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下列有关现代生物科技专题的叙述正确的有几项 ①基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 ②肝细胞在培养过程中，通常在培养液中加入5%的C02以刺激细胞呼吸 ③单克隆抗体的制备过程体现了动物细胞的全能性 ④大量研究己经证明，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这就为胚胎在受体内的存活提供了可能 ⑤胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移 ⑥限制性内切酶、DNA连接酶只存在于原核生物中 A.一项 B.两项 C.三项 D.四项
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| 22. 难度：中等 | |
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下列有关哺乳动物精子和卵细胞的发生以及受精作用的叙述中，错误的是 A.精子变形中，高尔基体发育为头部的顶体，细胞核变为精子头的主要部分 B.卵子形成时的两次分裂均在卵巢内完成，排出成熟卵子的过程即为排卵 C.卵子是否释放第二极体是卵子是否受精的标志 D.只有获能的精子和发育成熟的卵子相遇才能发生受精作用
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| 23. 难度：简单 | |
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“试管婴儿”技术是目前解决不孕症的有效手段，这项按术实际上是指受精卵在体外培养3d～5d，形成胚胎后移植回母体子宫，着床后继续发育形成胎儿直至分娩。下列有关“试管婴儿”的叙述中，正确的是（ ） A.该技术属于胚胎工程的技术范围 B.该技术充分体现了体细胞的全能性 C.该技术依据的原理是无性生殖，子代能保持母体的性状 D.“试管婴儿”的形成及发育过程中不会发生基因重组和突变
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| 24. 难度：中等 | |||||||||||||||||||||
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进行生物工程设计，选择好的实验材料是成功的一半，下表中选择的实验材料与实验目的搭配不当的一组是（ ）
A.A B.B C.C D.D
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| 25. 难度：中等 | |
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用胚胎干细胞(ES细胞)定向诱导分化出人造组织器官进行自体移植，可以解决临床上存在的供体器官不足和移植后免疫排斥的问题，下图表示胚胎干细胞分离和定向诱导分化的流程图，其中①～④为细胞或细胞结构，Ⅰ～Ⅳ为操作过程，下列叙述与图中相符的是( )
A.图中所涉及的现代生物技术有体细胞核移植技术、细胞培养技术 B.图中ES细胞是由③分离来的，此外还可以从原始性腺中分离 C.ES细胞在滋养层细胞上会向不同类型的组织细胞分化 D.过程V的结果多种多样的原因在于ES细胞具有发育的全能性
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| 26. 难度：中等 | |
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下图表示改造哺乳动物遗传特性的三种途径。相关叙述错误的是( )
A.获得动物1的受体细胞通常是受精卵 B.动物2体内各体细胞的基因种类相同 C.获得动物3的重组细胞具有全能性 D.上述动物的获得均需运用胚胎移植
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| 27. 难度：中等 | |
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高等哺乳动物受精后不久，受精卵开始进行细胞分裂。经桑椹胚、囊胚、原肠胚和组织器官的分化，最后发育成一个完整的幼体，完成胚胎发育的全过程。如图为该过程中的某一时期示意图，下列有关叙述错误的是 （ ）
A.图中①②③依次为透明带、滋养层、内细胞团 B.高等哺乳动物的细胞分化开始于图示时期，终止于生命结束 C.胚胎从①中伸展出来的过程叫做孵化 D.进行胚胎分割时，应选择图示时期之后的胚胎进行
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| 28. 难度：简单 | |
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下图是利用胚胎工程技术培育优质奶牛的主要步骤。下列叙述正确的是（ ）
A.A所表示的细胞不一定是受精卵细胞 B.图中a过程包括卵裂、囊胚和原肠胚等阶段 C.应把③移植到处于发情状态的母牛的输卵管中 D.图示过程使用了细胞培养、胚胎分割、核移植等生物技术
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| 29. 难度：中等 | |
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科学家将4个关键基因移植入已分化的肌肉细胞中并表达，使这个细胞成为多能干细胞(iPS细胞)。下图为该实验示意图。下列有关叙述正确的是( )
A. 应用该技术可提高器官移植的成功率 B. iPS细胞所带遗传信息与肌肉细胞相同 C. 关键基因表达使细胞功能趋向专门化，降低了细胞的分化程度 D. 图示过程体现了iPS细胞的全能性
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| 30. 难度：中等 | |
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下图为哺乳动物早期胚胎发育的过程，下列有关叙述错误的是 A.过程a和b使胚胎中有机物的含量减少 B.Ⅰ时期胚胎中的细胞具有全能性 C.胚胎移植必须使用处于Ⅱ或Ⅲ时期的胚胎 D.图示过程中，部分细胞中的遗传物质可能发生改变
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| 31. 难度：困难 | |
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软骨发育不全为常染色体显性遗传病，基因型为HH 的个体早期死亡。一对夫妻均为该病患者，希望通过胚胎工程技术辅助生育一个健康的孩子。下列做法正确的是( ) A. 将一个囊胚进行多等分，从中筛选所需胚胎，培养至原肠胚期后移植到子宫 B. 从桑椹胚中分离少量滋养层细胞，培养后检测基因型 C. 从羊水中提取细胞进行检测，并根据检测结果淘汰基因型为hh的胚胎 D. 经超数排卵处理后进行体外受精
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| 32. 难度：中等 | |
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杜泊羊具有生长快、肉质好等优点，科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示。下列问题叙述不正确的是（ ）
A.获取杜泊羊的卵母细胞时，可对供体母羊注射促性腺激素，使其排出更多的卵子 B.为保持精子与卵母细胞活性，采集到卵母细胞与精子后马上进行体外受精 C.体外培养受精卵时，合成培养基中通常需提供CO2以维持pH值 D.在胚胎移植前要对接受胚胎的当地普通绵羊进行同期发情处理
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| 33. 难度：困难 | |
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基因组编辑技术是研究基因生物功能的重要手段，下图是对某生物B基因进行定点编辑的过程，该过程中用sgRNA可指引核酸内切酶Cas9结合到特定的切割位点，相关说法不正确的是
A.靶基因部分序列与sgRNA通过碱基互补配对原则进行配对 B.核酸内切酶Cas9可断裂脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键 C.被编辑后的B基因与编辑前的B基因互称为非等位基因 D.通过破坏B基因后生物体的功能变化可推测B基因的功能
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| 34. 难度：困难 | |
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土壤农杆菌能将自身 Ti 质粒的 T-DNA 整合到植物染色体 DNA 上，诱发植物形成 肿瘤。T-DNA 中含有植物生长素合成酶基因（S）和细胞分裂素合成酶基因（R），它们的表达与否能影响相应植物激素的含量，进而调节肿瘤组织的生长与分化。据图分析，下列叙 述错误的是
A. 细胞分裂素与生长素的比值不同导致植物肿瘤分化生成不同组织 B. 该实例说明基因可以通过控制酶的合成来控制代谢过程，进而控制生物的性状 C. 细胞分裂素与生长素直接参与细胞代谢，进而调节肿瘤组织的生长与分化 D. 基因 S 与基因 R 能在植物体内成功表达，说明原核生物和真核生物共用一套密码子
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| 35. 难度：困难 | |
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下图表示某胚胎工程的流程图。据图分析，下列叙述不正确的是( ) ①→早期胚胎培养→早期胚胎→②→新个体 A. 若该工程表示的是转基因技术，则①是含有基因表达载体的受精卵 B. 若该工程表示的是核移植技术，则①的形成需要卵母细胞的参与 C. 若该工程表示的是胚胎分割技术，则①可以是桑椹胚 D. ②需对受体注射促性腺激素，以达到超数排卵和同期发情的目的
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| 36. 难度：困难 | |
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花粉植株是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。下面是培育四季柑桔(2N=18)花粉植株的过程示意图，有关叙述错误的是
A. 花粉植株培育的原理是花粉粒细胞具有全能性，其技术是植物组织培养 B. 过程③是细胞再分化，其根本原因是基因选择性表达 C. 四种培养基均属于固体培养基，其中所含植物激素的种类和比例有差异 D. 观察处于分裂中期的四季柑桔花粉植株根尖细胞，可观察到18条染色体
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| 37. 难度：中等 | |
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下图表示一个DNA分子的片段，有关叙述正确的是( ) A.④代表的物质中贮存了遗传信息 B.限制酶的作用部位是⑥ C.DNA连接酶可催化⑤处化学键的形成 D.DNA分子一条链中相邻碱基通过脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接
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| 38. 难度：困难 | |
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下图甲、乙、丙分别是目的基因、质粒载体、重组DNA（重组质粒）的三个示意图，限制酶有BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。要获得理想的可表达目的基因的重组DNA，最佳的限制酶组合方式是（ ）
A.用EcoRⅠ切割目的基因和质粒载体 B.用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和质粒载体 C.用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和质粒载体 D.用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和质粒载体
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| 39. 难度：中等 | |
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单克隆抗体制备过程中所用的骨髓瘤细胞是一种基因缺陷型细胞，其合成核酸的途径能被氨基喋呤阻断。现将从预先注射了某种抗原的小鼠脾脏中获得的多种B淋巴细胞与上述骨髓瘤细胞混合，加入PEG促融后，再加入含氨基喋呤的培养液。若将这些混合物分装于细胞培养板的小孔中培养（如图所示），则小孔中的培养物不可能出现的结果是( )
A.没有活细胞，不产生抗体 B.没有活细胞，产生抗体 C.细胞分裂繁殖，产生抗体，能检测到专一性抗体检验 D.细胞分裂繁殖，产生抗体，不能检测到专一性抗体检验
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| 40. 难度：困难 | |
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下图是植物体细胞杂交过程示意图，下列叙述正确的是
A.过程①需用纤维素酶和果胶酶溶液处理，且溶液的渗透压略大于细胞液渗透压 B.过程②可用聚乙二醇诱导原生质体融合，主要依据细胞膜具有选择透过性原理 C.过程③表示细胞壁的再生，④⑤需要根据生长发育进程更换不同的液体培养基 D.最终得到的植株相对于甲、乙，发生了染色体数目变异，因此不具有可育性
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| 41. 难度：困难 | |||||||||||||||
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下图1是获取用于构建基因表达载体的含人生长激素基因的DNA片段(DNA复制子链延伸方向是5′→3′，转录方向为左→右)示意图，图2是所用质粒示意图，其上的Ampr表示青霉素抗性基因，Tett表示四环素抗性基因。有关限制酶的识别序列和酶切位点如下表。请据图回答：
限制酶识别序列和酶切位点表
(1) ①过程催化形成磷酸二酯键的酶有____________________，合成的人生长激素基因中________(选填“有”或“无”)与终止密码子相应的碱基序列。 (2) 引物1由5′→3′的碱基序列为________________________，引物2应含有限制酶________的识别序列；从图1的过程②开始进行PCR扩增，第六次循环结束时，图中用于构建基因表达载体的DNA片段所占比例是________。 (3) 在构建表达载体的过程中对图中质粒、DNA片段进行合适的完全酶切后，向两者的混合物中加入DNA连接酶，若只考虑DNA切段两两连接，则混合物中将形成________种环状DNA。
(4) 2018年11月基因编辑婴儿事件震惊了世界，舆论一片哗然，某科研团队利用“CRISPR/Cas9”技术将受精卵中的艾滋病病毒受体基因CCR5进行修改，拟培育出具有艾滋病免疫能力的基因编辑婴儿。下图3为向导RNA引导Cas9蛋白切割CCR5基因(目标DNA)示意图。 ①向导RNA的合成需要________酶。Cas9蛋白是一种________酶。 ②“GRISPR/Cas9”技术，是利用________法将Cas9蛋白和特定的引导序列导入受精卵中发挥基因编辑作用。 ③基因编辑婴儿引起舆论的关注，很多科学家表示反对，请给出合理的理由______________。
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| 42. 难度：中等 | |
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科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多功能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠。流程如下：
（1）要获取iPS细胞，首先要进行黑鼠体细胞体外培养。为了方便实验开展，可以对黑鼠组织用胰蛋白酶处理，其目的是消化______，以获得单个细胞的悬浮液。然后通过______得到纯系的细胞群。 （2）对从灰鼠的______部位获取的2-细胞胚胎，进行体外培养至囊胚后，将其制成重组囊胚。重组囊胚移植到白鼠体内后其______部分会发育形成胚胎的附属结构或胚外结构，而______分化出成体动物的所有组织和器官。 （3）制备iPS细胞的方法是把0ct4等转录因子在基因导入小鼠成纤维细胞，诱导其发生转化，从而产生iPS细胞。在基因导入过程中，除了质粒外，还可以选用______为运载体。若将某目的基因导入的受体细胞为大肠杆菌时______（能/不能）选用T2噬菌体为运载体。
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| 43. 难度：困难 | |
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人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转HSA基因奶牛，并通过乳腺生物反应器生产HSA，其主要技术流程如下图所示：
回答下列问题： （1）如上图所示，供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是 _______________________________________________________________。 （2）SRY-PCR法性别鉴定的基本程序是：提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后对扩增产物进行检测。
要大量获得SRY基因，PCR扩增时需要加入两种引物：__________________（选填“引物I”、“引物II”、“引物III”、“引物IV”），原因是DNA聚合酶只能从核苷酸链的______________（2分，选填“5’端”或“3’端”）开始延伸DNA链，用两种引物才能确保______________。除引物外，PCR反应体系中还包含缓冲液、模板DNA、____________和 ____________等成分。通过SRY-PCR法进行性别鉴定，可获得更多的转HSA基因________牛，以便其通过乳腺生物反应器生产人血清白蛋白。 （3）在胚胎移植操作中，应对供体和受体母牛进行_____________处理，目的是使供体和受体处于相同的生理状态，使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。由此可见，胚胎移植的实质是_____________________________________________。
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| 44. 难度：困难 | |
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hNaDC3（人钠/二羧酸协同转运蛋白-3）主要分布于肾脏等重要器官，它具有促进人肾小管上皮细胞能量代谢和转运等功能。科研人员利用基因工程技术构建绿色荧光蛋白与hNaDC3融合基因，并在肾小管上皮细胞中表达，以动态观察hNaDC3在肾小管上皮细胞中的定位情况，为进一步研究hNaDC3的生理功能奠定基础。研究主要过程如图（实验中使用的限制酶SacⅠ的识别序列是GAGCT↓C，限制酶SacⅡ识别序列是CCGC↓GG）。请分析回答：
（1）与PCR相比，过程①需要的特有的酶是______，应从人体______（器官）的组织细胞中获得模板RNA。 （2）DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是______。过程②选用SacⅠ、SacⅡ分别切割hNaDC3基因和质粒载体，可实现目的基因定向插入并正常表达的原因是______。 （3）过程③可获得多种重组DNA，可依据不同DNA分子的大小，运用______（技术）分离、筛选重组表达载体。 （4）显微观察导入“绿色荧光蛋白-hNaDC3融合基因”的猪肾小管上皮细胞后发现：转染后第1天绿色荧光混合分布于细胞质和细胞膜，核中未见绿色荧光；到第5天绿色荧光清晰聚集于细胞膜，细胞质和细胞核中未见绿色荧光。根据这一观察结果还不能得出“hNaDC3是在细胞质中生成后，在细胞膜上发挥作用”的结论，需要设置对照实验以排除绿色荧光蛋白本身的定位，对照实验的设计思路是______。 （5）研究人员以较高浓度的葡萄糖溶液培养导入融合基因的猪肾小管上皮细胞，一段时间后发现，转染细胞的细胞膜上绿色荧光明显增强。这一实验结果可以说明______。
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| 45. 难度：困难 | |
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疫苗和抗体已被广泛应用于预防与诊疗传染性疾病的过程，已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如下图所示，请回答下列问题： (1)③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它们应该能被受体细胞的________所识别，以便于其催化转录过程。 (2)下图为A基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区域转录产生的能指导蛋白质合成的mRNA中A和U总数是________个。
(3)在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的________数目。过程⑥的实质为________。 (4)在将X进行扩大培养前，至少需要经过________次筛选，其中包括_______________和__________,扩大培养的原理是________。 (5)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的________与分离出的病毒进行特异性检测。
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| 46. 难度：中等 | |
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胚胎工程技术包含的内容很丰富。下图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛。请据图回答下列问题：
（1）图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的有应用______（填数字）。 （2）人工授精时，受精卵形成的场所是在______，防止多精入卵的屏障有______； 若在应用2中进行冲卵操作，则该操作的生理学依据是______。 （3）若采取体外受精的方法获得受精卵，将优良公牛的精子收集后放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是______。 （4）细胞A~D中属于原始性腺细胞的是______（填字母）。 （5）为一次获得多个细胞B，需向供体2注射______。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意______，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
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