| 1. 难度：中等 | |
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微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。下列无菌操作错误的是（ ） A.尿素溶液通过细菌过滤器除菌 B.菌种和培养基使用前均需灭菌处理 C.接种前、后都要过火灼烧斜面菌种试管管口 D.高压蒸汽灭菌既能杀死微生物的营养体，也能杀死芽孢等休眠体
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| 2. 难度：中等 | |
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利用葡萄汁发酵产生果酒的过程中，未经高压蒸汽灭菌，其他杂菌也不能生长的原因是 A. 经冲洗后的葡萄上只有野生型酵母菌，无其他杂菌 B. 其他杂菌不能利用葡萄汁中的糖作为碳源 C. 在无氧的条件下，其他杂菌不能进行细胞呼吸 D. 在缺氧的发酵液中，酵母菌代谢产生酒精抑制其他杂菌生长
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| 3. 难度：中等 | |
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天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。下列表述正确的是
A. 酒精发酵阶段需要多次补充氧气利于酵母菌的繁殖 B. 老醋生产工艺流程只存在酵母菌、醋酸杆菌两种微生物 C. 糖化阶段添加酶制剂可促进淀粉水解产生葡萄糖 D. 醋酸发酵阶段需要通气的原因是促进醋酸杆菌通过有氧呼吸产生醋酸
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| 4. 难度：中等 | |
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“筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是（ ） A.在牛肉膏蛋白胨培养基中，筛选大肠杆菌 B.在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物 C.用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物 D.在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物
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| 5. 难度：中等 | |
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下图平板示某同学用牛肉膏蛋白胨培养基培养相同土壤样品中微生物的结果。下列表述正确的是（ ）
A.乙平板中的微生物都是同一物种 B.甲图结果更利于进行土壤中微生物的计数 C.甲是平板划线法接种获得的结果，乙是稀释涂布平板法接种获得的结果 D.利用划线法可进一步将甲或乙中的单菌落接种在斜面培养基上纯化培养
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| 6. 难度：中等 | |
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下列有关DNA粗提取与鉴定过程的叙述中，正确的是 A. 将猪的成熟红细胞置于清水中，红细胞涨破后将DNA释放出来 B. 用2mol/L的氯化钠溶液溶解提取物并离心后，须保留上清液 C. 在提取液中加入75%的冷冻酒精后蛋白质会与DNA分离并析出 D. 将提取到的丝状物与二苯胺溶液充分混匀后溶液迅速变为蓝色
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| 7. 难度：中等 | |
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关于PCR扩增DNA片段和电泳检测扩增产物实验的描述中不正确的是 A.PCR过程需要耐高温的Taq酶 B.PCR过程需要DNA连接酶 C.PCR扩增区域有2个引物来决定 D.不同大小的DNA在电场中迁移速率不同
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| 8. 难度：中等 | |
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基因工程是在DNA分子水平上进行设计操作的，在基因工程操作的基本步骤中，一定不进行碱基互补配对的是 A.利用PCR技术扩增目的基因 B.目的基因与运载体的黏性末端结合 C.抗原-抗体杂交检测目的基因表达 D.DNA探针检测受体细胞的目的基因
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| 9. 难度：中等 | |
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SPL蛋白是植物中广泛存在的一类调控基因转录的分子。不同植物的SPL蛋白结构不同，但均有一个大约由80个氨基酸构成的结构相同的功能区，可识别并结合到某些基因的特定区域。SPL基因最初是从植物花序cDNA文库中得到的。下列相关叙述正确的是 A.SPL是80个氨基酸构成的蛋白质 B.SPL基因能在花序细胞中表达 C.SPL可催化特定基因的翻译过程 D.SPL在不同绿色植物中功能差异较大
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| 10. 难度：简单 | |
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用人的生长激素基因制成DNA探针检测下列物质，能形成杂交分子的是 ①人脑垂体细胞的DNA ②人下丘脑细胞的mRNA ③人脑垂体细胞的mRNA ④人下丘脑细胞的DNA A.①②③④ B.①②③ C.①③④ D.①③
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| 11. 难度：中等 | |
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近年诞生的具有划时代意义的CRISPR/Cas9基因编辑技术可简单、准确地进行基因定点编辑。其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割（见图）。下列相关叙述错误的是
A.Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成 B.向导RNA中的双链区遵循碱基配对原则 C.向导RNA可在逆转录酶催化下合成 D.若α链剪切点附近序列为……TCCACAATC……，则相应的识别序列为……UCCACAAUC……
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| 12. 难度：中等 | |
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甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F1，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种，以下对相关操作及结果的叙述，错误的是 A. 将含有目的基因和标记基因的载体导入受体细胞 B. 通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定 C. 调整培养基中植物激素比例获得F1花粉再生植株 D. 经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体
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| 13. 难度：中等 | |
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下图为烟草植物组织培养过程的示意图。下列有关叙述正确的是
A. 对过程①获取的根组织块应做较彻底的灭菌处理 B. 过程②应使用适宜的培养基，在避光环境中进行 C. 过程③发生脱分化，其实质是基因的选择性表达 D. 用人工种皮包裹X细胞，可获得烟草的人工种子
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| 14. 难度：中等 | |
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为探究矮牵牛原生质体的培养条件和植株再生能力，某研究小组的实验过程如下图。下列叙述正确的是( )
A. 过程①获得的原生质体需悬浮在质量浓度为0.3g/mL的蔗糖溶液中 B. 过程②需提高生长素的比例以促进芽的分化 C. 过程③需要用秋水仙素处理诱导细胞壁再生 D. 原生质体虽无细胞壁但仍然保持细胞的全能性
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| 15. 难度：中等 | |
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下列有关动物细胞培养技术的叙述，正确的是 A. 用于培养的细胞多取自胚胎或幼龄动物，因为它们的全能性高 B. 动物细胞培养过程中可能发生突变，进而能够在体外无限增殖 C. 动物细胞培养的主要目的是为了获得细胞分泌的蛋白质 D. 在培养过程中通常要通入5%的CO2刺激细胞呼吸
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| 16. 难度：简单 | |
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下列关于动物细胞培养、植物组织培养和微生物培养的叙述，正确的是 A.培养基都需要加入琼脂 B.都需要加入天然的营养成分 C.都需要控制无菌培养条件 D.都要经历脱分化和再分化过程
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| 17. 难度：中等 | |
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将人细胞与小鼠细胞融合，培养出的杂种细胞可能会随机丢失来自人细胞的染色体。在丢失人的1号染色体的融合细胞中，不能合成人的尿苷单磷酸激酶。下列有关叙述中不合理的是 A.与人和小鼠细胞相比，融合细胞发生了遗传物质的改变 B.研究方法中需要选择适当的培养基和细胞融合诱导技术 C.融合细胞经过培养，能实现细胞的全能性 D.尿苷单磷酸激酶的基因很可能在1号染色体上
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| 18. 难度：困难 | |
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如图，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。关于筛选原理的叙述正确的是 A. 免疫的B细胞及其相互融合细胞因全合成途径被A阻断，在HAT培养基上不能增殖 B. 骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进行上述两个途径，而在HAT培养基上不能增殖 C. 杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖 D. HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，既能大量增殖又能产生较高纯度的目标抗体
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| 19. 难度：困难 | |
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犬细小病毒(CPV)单克隆抗体(Cpv McAb)可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制，进而杀灭幼犬体内病毒。下列相关叙述，错误的是 A.在Cpv McAb的制备过程中用到了动物细胞培养和动物细胞融合技术 B.给幼犬注射CPV后，CPV抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫反应 C.经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可直接生产Cpv McAb D.对杂交细胞培养时，需要无菌无毒环境，且温度、气体环境等要适宜
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| 20. 难度：困难 | |
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细胞毒素可有效杀伤肿瘤细胞，但没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造 成伤害。下图是特异性杀死肿瘤细胞的过程，图中抗体是利用单克隆抗体技术制备的。下列 叙述正确的是（ ）
A.单克隆抗体制备过程中需要使用 Taq 酶 B.抗体与细胞毒素结合增加了细胞毒素的杀伤力 C.细胞毒素具有与肿瘤细胞膜上的糖蛋白发生特异性结合的能力 D.溶酶体破裂导致其中的蛋白酶及其它水解酶释放，加速了肿瘤细胞凋亡
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| 21. 难度：中等 | |
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下图为受精作用及胚胎发育示意图，a、b代表两个发育时期，下列叙述错误的是（ ）
A.①过程发生同源染色体分离 B.②过程通过有丝分裂增殖 C.胚胎发育到③过程开始发生分化 D.处于a、b时期的胚胎中均具有囊腔
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| 22. 难度：中等 | |
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科学家通过将大熊猫的细胞核植入去核的兔子卵细胞中，克隆出一批大熊猫胚胎。下列有关克隆大熊猫胚胎的叙述中，正确的是（ ） A.克隆出的早期胚胎，其各细胞的细胞核具有相同的遗传信息 B.兔子卵细胞的细胞质不能激发大熊猫细胞的细胞核表现出全能性 C.在形成早期胚胎的过程中，依次经历了卵裂胚、囊胚、桑椹胚、原肠胚等阶段 D.重组卵发育成早期胚胎的过程一直在透明带内进行
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| 23. 难度：中等 | |
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下列生物技术操作对遗传物质的改造，不会遗传给子代的是 A. 将胰岛素基因表达质粒转入大肠杆菌，筛选获得基因工程菌 B. 将花青素代谢基因导入植物体细胞，经组培获得花色变异植株 C. 将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，培育出产低乳糖牛乳的奶牛 D. 将腺苷酸脱氨酶基因转入淋巴细胞后回输患者，进行基因治疗
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| 24. 难度：中等 | |
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下列关于生物工程的叙述中，不正确的是 A.动物细胞培养可用于检测有毒物质 B.经诱导融合得到的植物杂种细胞，需经组织培养才能获得杂种植株 C.人工合成法获得的人胰岛素基因与体内该种基因的碱基排列顺序可能不完全相同 D.DNA探针可用于检测苯丙酮尿症和21三体综合征
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| 25. 难度：中等 | |
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下列关于培养基的叙述，正确的是（ ） A.从土壤中分离分解纤维素的微生物，可以先用不加刚果红的液体培养基选择培养，以增加纤维素分解菌的浓度 B.可利用液体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型 C.培养微生物时，培养基中均需添加水、碳源、氮源、无机盐 D.感染杂菌的培养基和使用过的培养基都必须经灭菌处理后才能丢弃
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| 26. 难度：中等 | |
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抗生素是某些微生物产生的能杀死或抑制其他微生物生长的化学物质。下图表示从土壤中筛选某种抗生素产生菌的过程，相关叙述正确的是（ ）
A.菌株的透明圈越大，其产生的抗生素抑菌效果越好 B.没有透明圈产生的菌株一定不能产生抗生素 C.接种测试菌3时，接种环可能在灼烧后未冷却 D.测试菌2、5对该菌产生的抗生素具有抗性
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| 27. 难度：中等 | |
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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过PCR技术扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，引物1和引物2分别与MT基因两端的序列互补。下列表述正确的是（ ）
A.引物1和引物2的序列相同，且序列已知 B.步骤1需要解旋酶，步骤2需要耐高温的DNA聚合酶，步骤3需要DNA连接酶 C.第三轮循环后，可扩增出2个所需要的目的基因分子 D.为方便构建重组质粒，可在引物中设计适当的限制性核酸内切酶位点
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| 28. 难度：困难 | |
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下列关于细胞工程的有关叙述，正确的是( ) A. 利用花药离体培养得到单倍体植株，从紫草的愈伤组织中提取紫草素，利用细胞工程培育“番茄 、马铃薯”杂种植株，都利用了植物组织培养技术 B. 在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，不可能会发生细胞脱分化和基因突变，而可能发生细胞分化和基因重组 C. 动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法、所用的技术手段、所依据的原理均相同，都能形成杂种细胞和杂种个体 D. 动物难以克隆的根本原因是基因组中的基因不完整
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| 29. 难度：中等 | |
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“筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列关于筛选的叙述中正确的是（ ） A.基因工程中用同种限制性核酸内切酶切割运载体和目的基因，酶切产物用DNA连接酶连接，为了保证成功率，需将获得的产物筛选后导入受体细胞 B.单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第一次筛选出的是杂交瘤细胞 C.单克隆抗体制备过程中，在完成细胞融合后，第二次筛选出的是针对目标抗原的抗体检验为阳性的杂交瘤细胞 D.为了快速繁殖无子西瓜，需筛选出特定染色体组数的体细胞才能进行组织培养
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| 30. 难度：中等 | |
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模型是人们为了某种特定目的而对认识的对象所做的一种简化的概括性描述，模型构建是生命科学教学、研究和学习的一种重要方法。对图1和图2两个生物概念模型的理解或者分析正确的是（ ）
A.若图1表示基因工程的操作流程图，则C表示重组质粒，D是受体细胞 B.若图1表示植物体细胞杂交过程，则A、B在融合前必须经过特殊处理——制备原生质体，形成的C称为杂种细胞，从C到D需要的技术是植物组织培养 C.若图2中B是核移植技术，C是胚胎移植技术，则形成d的过程体现了高度分化的动物体细胞也具有全能性 D.若图2中B表示下丘脑，C表示垂体，切断下丘脑与垂体的联系，对胰岛的影响比对甲状腺、肾上腺的影响更小
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| 31. 难度：中等 | |
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为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题： （1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_________________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为46、51和47。据此可得出每升水样中的活菌数为___________。 （2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_________________。若得到如图所示结果，在整个接种过程中，接种环至少需要烧灼________次。 （3）示意图A和B中，_______表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：________________________。
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| 32. 难度：中等 | |
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B基因存在于水稻基因组中，其仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，但在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验。
据图回答： （1）B基因在水稻卵细胞中不转录，推测其可能的原因是卵细胞中________。 A.含B基因的染色体缺失 B.DNA聚合酶失活 C.B基因发生基因突变 D.B基因的启动子无法启动转录 （2）从水稻体细胞或________中提取总RNA，构建____________文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。将该序列与Luc基因（表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光）连接成融合基因（表达的蛋白质能保留两种蛋白质各自的功能），然后构建重组表达载体。 （3）在过程①、②转化筛选时，过程______________中T-DNA整合到受体细胞染色体DNA上，过程__________________在培养基中应加入卡那霉素。 （4）获得转基因植株过程中，以下鉴定筛选方式正确的是________。 A.将随机断裂的B基因片段制备成探针进行DNA分子杂交 B.以Luc基因为模板设计探针进行DNA分子杂交 C.以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针与从卵细胞提取的mRNA杂交 D.检测加入荧光素的卵细胞中是否发出荧光 （5）从转基因植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，由此表明_________________。
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| 33. 难度：困难 | |
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水稻穗粒数可影响水稻产量。农杆菌Ti质粒上的T-DNA序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的核基因组中，导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体进行了相关研究。 （1）研究者分别用EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ三种限制酶处理突变体的总DNA，用Hind Ⅲ处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段______。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T-DNA片段）进行杂交，得到下图所示放射性检测结果。
①由于杂交结果中____________________________________________，表明T-DNA成功插入到水稻染色体基因组中。（注：T-DNA上没有EcoRⅠ、Hind Ⅲ、BamHⅠ三种限制酶的酶切位点） ②不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于_____________________________________。 ③由实验结果断定突变体为T-DNA单个位点插入，依据是____________________________________。 （2）研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用__________将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用图中的引物__________组合进行PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T-DNA插入了2号染色体上的B基因中。
（3）研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能_______（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。育种工作者希望利用B基因，对近缘高品质但穗粒数少的低产水稻品系2进行育种研究，以期提高其产量，下列思路最可行的一项是______。 a．对水稻品系2进行60Co照射，选取性状优良植株 b．培育可以稳定遗传的转入B基因的水稻品系2植株 c．将此突变体与水稻品系2杂交，筛选具有优良性状的植株
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| 34. 难度：中等 | |
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花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题： （1）过程①所需的酶是__________。 （2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的_________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。 （3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是__________________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。 （4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。 （5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1～4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1～4中一定是杂种植株的有________。
（6）对杂种植株进行________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
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| 35. 难度：中等 | |
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利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪，可用于生产基因工程疫苗。下图为基因编辑猪培育流程，请回答下列问题：
（1）对1号猪使用激素处理，使其超数排卵，收集并选取处在__________时期的卵母细胞用于核移植。 （2）采集2号猪的组织块，用__________处理获得分散的成纤维细胞，放置于37℃的CO2培养箱中培养，其中CO2的作用是____________________________。 （3）将重组胚胎移植到3号猪的子宫中，产出的基因编辑猪的性染色体来自于_________号猪。 （4）为检测病毒外壳蛋白基因是否被导入4号猪并正常表达，可采用的方法有__________（填序号）。 ①DNA测序 ②染色体倍性分析 ③体细胞结构分析 ④抗原—抗体杂交
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| 36. 难度：困难 | |||||||||||||||||
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豆科作物的根瘤菌能够固氮，而禾本科植物不能。所以在农业实践中，将豆科植物和禾本科植物间作以提高禾本科植物的产量。研究发现产量提高与土壤中吸收氢气的细菌有直接关系，为探究其中的具体机制，进行以下三个实验。 （1）实验一：验证豆科植物固氮反应能产生氢气，且氢气被土壤吸收。 供选材料：豆科植物苜蓿苗，禾本科植物小麦苗；灭菌的沙子，普通土壤。 供选仪器：收集氢气的设备 实验方案： 实验过程及结果：若假设成立，请将下表补充完整。
（2）实验二：为探究氢气通过何种途径被土壤吸收，进行如下假设。 假设：氢气被土壤中的细菌吸收。 供选材料：苜蓿苗，普通土壤，抗生素（根瘤菌不敏感），杀真菌剂，2，4-D，萃乙酸。 供选仪器：收集氢气的设备 实验方案：针对假设在实验中除了选择________和________分别对土壤进行处理后栽培苜蓿苗，还需使用________的土壤栽培苜蓿苗作为对照。 若假设成立，针对实验方案描述实验结果：________________________________。 （3）实验三：探究土壤中吸收氢气的细菌（氢氧化细菌）是否有促进植物生长的作用。 假设：氢氧化细菌可以促进植物生长。 供选材料：1．2m×2m的实验田，小麦种子，氢氧化细菌菌株A1，B1，C1，D1，E1；非氧化细菌菌株A2，B2，C2，D2，E2；大肠杆菌。 实验方案：用不同的菌株分别拌种，种植在实验田中，一段时间后记录小麦初生菌的相数据。 实验结果：平均胚根长度（mm），根相对生长（％）。 A1：平均胚根长度13，根相对生长163； E2：平均胚根长度8，根相对生长100； D2：平均胚根长度8，根相对生长100； B1：平均胚根长度30，根相对生长375； C2：平均胚根长度8，根相对生长100； C1：平均胚根长度12，根相对生长150； D1：平均胚根长度33，根相对生长4．63； E1：平均胚根长度20，根相对生长250； A2：平均胚根长度8，根相对生长100； B2：平均胚根长度3，根相对生长38； 大肠杆菌：平均胚根长度8，根相对生长100。 针对假设对上述数据进行统计处理，用合适的表格表达：________ 结论：综合以上三个实验的结果可见，土壤中的氢氧化细菌在促进植物生长中起重要作用。
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