| 1. 难度：中等 | ||||||||||||||||
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（2014•和平区二模）某生物兴趣小组以带有落叶的表层土壤（深5cm左右）为实验材料，研究土壤微生物在适宜温度下的分解作用，对土壤处理情况见下表．与此有关的叙述不正确的是（ ）
A.探究的问题是不同土壤湿度条件下，土壤微生物对落叶的分解作用 B.该实验的自变量为土壤的是否灭菌处理，实验中的对照组是1和3 C.为了控制实验中的无关变量，作为实验材料的落叶也应进行灭菌处理 D.预期结论是1、3组的落叶不被分解，2、4组中的落叶被不同程度的分解
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| 2. 难度：中等 | |
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（2013•惠州模拟）下列说法正确的是（ ） A.从落叶丰富的土壤中筛选能分解纤维索的细菌 B.家庭利用酵母菌制作腐乳 C.用红色西瓜汁作还原糖鉴定的替代材料 D.观察线粒体时，利用甲甚绿染液将线粒体染成绿色，再用显微镜观察
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| 3. 难度：中等 | |
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欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（ ） A.将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释 B.同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板 C.可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照 D.用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
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| 4. 难度：中等 | |
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为探究落叶是否在土壤微生物的作用下腐烂，下列各项构成了一个实验设计，其中不符合实验目的步骤是（ ） A.可选择带有落叶的土壤为实验材料，筛出落叶和土壤 B.将落叶平均分成两份，把土壤也平均分成两份 C.将灭菌的落叶设为实验组，不做处理的落叶设为对照组 D.将落叶分别埋入两组土壤中，观察腐烂情况
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| 5. 难度：中等 | |
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为了解土壤微生物是否能分解农药，并尽快得出实验结论，有人用“敌草隆”（一种除草剂）进行了实验，取等量砂土分装于相同的两容器中，a组高压灭菌，b组不灭菌，下列有关事项肯定错误的是（ ） A.a组为实验组，b组为对照组 B.向a、b中喷入等量敌草隆，再置于同一温箱中培养相同时间 C.检测敌草隆消失的情况，预计a组敌草隆含量不变，b组敌草隆全部分解 D.只用砂土，实验效果不如几种典型土壤混合后的好
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| 6. 难度：中等 | |
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（2012•唐山三模）由于石油价格的不断上涨，替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等开发备受世界关注，有人想利用玉米秸秆生产燃料酒精，其大致流程如图所示：
（1）玉米秸秆预处理后，应该选用 纤维素 酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖． （2）分离这种水解酶的野生菌株一般从土壤中筛选，所需要的培养基为 选择 培养基，但现有野生菌株对玉米秸秆的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株． 实验步骤： ①配置 固体 （固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为 纤维素 ． ②将野生菌株接入已经 高压蒸汽灭菌 法灭菌的培养基平板上． ③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行 诱变 ． ④菌落形成后，加入 刚果红 染料，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小．周围出现 透明圈范围大 （现象）的菌落即为初选菌落． ⑤分离、纯化菌种时为得到单菌落，常用 平板划线 和 稀释涂布平板 接种方法． （3）发酵阶段需要的菌种是 酵母菌 ，生产酒精必要控制的条件是 无氧（密封、密闭） ． （4）生产的酒精易挥发但又可溶于水，宜选用 水蒸气蒸馏 方法从酵母菌的代谢产物中提取．
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| 7. 难度：中等 | |
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（2013•辽宁二模）[生物﹣﹣选修l生物技术实践] 下列是对土壤微生物开展探究活动的三个案例，请在相应的空白处作答． （1）案例l：探究落叶在土壤微生物的作用下是否发生腐烂（分解）． 设计思路： 组别 对照组 实验组 处理 情况 不做处理的带落叶的土壤 处理过的带落叶的土壤 将等量的带落叶的土壤，用带有编号的相同的塑料袋分别包扎好，并埋在5cm深的土壤中 对实验组土壤应该进行 灭菌 处理，尽可能排除 土壤微生物 的作用． （2）案例Ⅱ：探究土壤微生物对淀粉的分解作用． 实验步骤： ①将取自农田的土壤制成土壤浸出液，放在烧杯中静置一段时间． ②另取两只烧杯，编号为A、B，放入等量的淀粉糊．在A烧杯中加入30mL土壤浸出液，B烧杯中加入 30 mL（等量）蒸馏水（无菌水） ． ③在室温条件下放置7天后，从A烧杯中取20mL溶液，分别加入A1和A2两支试管各10mL；从B烧杯中取20mL溶液，分别加入B1和B2两支试管各10mL． ④在A1和B1中加入碘液；在A2和B2中加入 （等量的）斐林试剂 ，并进行 水浴加热 处理． ⑤观察各试管的 颜色变化 ，记录实验结果． （3）案例Ⅲ：探究土壤微生物中是否含有分解纤维素的细菌的实验过程中，应将土壤浸出液接种在以 纤维素 为惟一碳源的培养基上，并用 刚果红 （试剂）加以鉴别．
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| 8. 难度：中等 | |
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（2014•河南模拟）聚羟基丁酸酯可被用于制造生物可降解塑料．如图是科研人员用微生物发酵技术以蔗糖为原料生产生物可降解塑料的过程示意图，请据图回答： （1）制备筛选碱性天然菌种的培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、 倒平板 ．培养基中的蔗糖可以为微生物的生长提供 碳源 ．该培养基除含有微生物所需的各种营养物质外，还应注意调整适宜的 PH ． （2）为了获得纯净的培养物，实验用的培养基最好选用 高压蒸汽灭菌 法进行灭菌． （3）为了检测菌液中活菌的数量是否适宜，可以采用 显微镜直接计数（稀释涂布平板法） 法进行计数，该方法计数的结果与实际数目相比 偏大（偏小） （偏大/偏小）． （4）为使微生物易于从发酵液中分离且达反复使用的目的，可采用 固定化细胞 技术进行处理．该技术通常采用的方法是 包埋法 ．
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| 9. 难度：中等 | |
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（2013•东城区二模）农作物秸秆在生产实践中具有多种用途．在特定微生物产生的纤维素酶的催化下，秸秆中的纤维素可被分解为葡萄糖，经发酵后形成乙醇，再加工即可制成燃料乙醇，减少了人类生活对石油资源的依赖．请分析回答： （1）欲从土壤中分离获取上述特定微生物，可采用稀释涂布法或 平板划线 法进行接种，所用培养基以纤维素为唯一碳源，目的是只允许能产生 纤维素酶 的微生物生长，而其他微生物均不能生长．在培养基中加入适量的刚果红染料，若观察到 菌落周围出现透明圈 即可初步筛选到目的菌． （2）某研究人员经上述培养获得了三种微生物（甲、乙、丙），现通过如下实验比较三种微生物所产生纤维素酶的活性大小． ①将甲、乙、丙三种微生物经离心等方法处理后，制成酶浓度相同的纤维素酶提取液，取等体积的三种提取液分别与等量的纤维素悬浮液混合，在相同且适宜的pH和温度条件下放置一段时间． ②利用 斐林 试剂检测产物中的葡萄糖，并通过比较颜色深浅程度判断酶活性的大小． ③实验结果如下： 甲提取液 乙提取液 丙提取液 颜色深浅程度 + +++ ++ 注：“+”越多，颜色越深 由表分析，三种微生物产生的纤维素酶活性不同，最可能的原因是 不同酶的氨基酸序列不同（或不同酶的空间结构不同） ．其中产生酶活性最强的微生物是 乙 ． （3）农作物秸秆除用于生产燃料乙醇外，还可用于培育蘑菇和生产沼气等．下图为某生态农场的部分结构模式图．
水稻、杂草在此生态系统的组成成分中属于 生产者 ．输入到鸭体内的能量除通过呼吸作用以热能形式散失外，还用于鸭自身的 生长、发育、繁殖 等生命活动．在农业生产上，将蘑菇房与蔬菜大棚连通可提高蔬菜产量，增产的原因最可能是 蘑菇产生的CO2为蔬菜光合作用提供原料 ． （4）对农作物秸秆的充分利用可促进生态系统中物质在 生物群落与无机环境 之间不断地循环往返，同时合理调整了生态系统中的能量流动关系，有效缓解了燃烧秸秆造成的污染和浪费．
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| 10. 难度：中等 | |
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（2013•石家庄二模）下表是探究落叶在土壤微生物的作用下是否发生腐烂（分解）的设计思路： 组别 对照组 实验组 处理情况 不做处理的带落叶的土壤 处理过的带落叶的土壤 将等量的带落叶的土壤，用带有编号的相同塑料袋分别包扎好，并埋在5cm深的土壤中 请回答下列问题： （1）对实验组土壤应该进行 灭菌 处理，尽可能排除 土壤微生物 的作用． （2）探究土壤微生物中是否含有分解纤维素的细菌的实验过程中，应将土壤浸出液接种在以 纤维素粉 为唯一碳源的培养基上，这样的培养基属于 选择 培养基． （3）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方式有两种，即 平板划线法 和 稀释涂布平板法 ．并用 刚果红 （试剂）加以鉴别．当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生 透明圈 来筛选纤维素分解菌．
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| 11. 难度：中等 | |
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（2013•黄州区一模）【生物一选修模块1：生物技术实践】 请回答下列与生物技术实践相关的问题： （1）利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取．科学家利用培养基从土壤中筛选出能分解纤维素的细菌，这类细菌经过大量培养后可以从中提取纤维素酶． ①土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可得到能分解纤维素的细菌，实验室中获取纯净菌种常用的接种方法有 平板划线法 和 稀释涂布平板法 ． ②虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、 无机盐、碳源、氮源 （2）酵母菌是一种真菌，可用于制作果酒． ①果汁发酵后是否产生酒精，可以用 重铬酸钾 来检验，在酸性条件下，该物质与酒精反应呈现特定的颜色． ②酵母菌细胞固定化可大大提高生产效率．固定酵母菌细胞时首先需要将干酵母放入 蒸馏水 中活化；若制得的凝胶珠着色过浅，可能是 海藻酸钠浓度过低 ． （3）突变菌往往带有一些特殊的基因，在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要．PCR扩增反应中加入引物的作用是 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 ． （4）加酶洗衣粉中有的加香精，高档洗衣粉中的香精是由植物芳香油制成的，目前从植物中提取芳香油的方法有 萃取法、蒸馏法、压榨法 等．
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| 12. 难度：中等 | |
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（2013•朝阳区一模）从某地分离到能分泌纤维素酶的枯草杆菌，对此菌进行诱变，利用染色法筛选纤维素酶产量高的菌体．（染色法：染料和培养基中的纤维素发生颜色反应，当纤维素被菌体水解，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈） （1）实验材料：菌体悬液，紫外灯，添加 纤维素 为碳源的选择培养基，培养皿等 （2）实验过程及结果预期： a．将菌体悬液稀释至适当浓度，平均分成甲、乙两组． b．甲组用 适当剂量（强度） 的紫外灯照射一定时间，乙组不做处理． c． 将等量甲乙两组菌液 接种至选择培养基上． d．观察并测量 透明圈 的直径与相应菌落直径 e．若甲组中出现了纤维素酶产量高的酶体，其形成的酶落表现为 透明圈的直径与相应菌落直径比值 比乙组相应值的平均值大． （3）甲组中会出现纤维素酶产量不同的酶体，此现象是由于紫外线的照射改变了基因的 结构（或碱基排列顺序） ，即发生了 基因突变 （变异类型），体现了此变异的 不定向 特点． （4）枯草杆菌因没有 生物膜 系统，其分泌纤维素酶与真核细胞蛋白质的分泌方式不同． （5）若用液体培养上述细菌，研究其数量变化规律，绘制出该菌的生长速率曲线如图，据图描述此菌的种群数量的变化规律是 先S型增长后下降（首先平稳随后增加再平稳之后下降） ．
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| 13. 难度：中等 | |
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（2012•临沂二模）【生物一生物技术实践】 废纸的主要成分是木质纤维，科技人员将其转化为一种新的资源﹣﹣乙醇．下图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工艺流程．请回答相关问题：
（1）①环节要选择的微生物是 纤维素分解酶 ，可将从富含纤维素土壤中获得的微生物培养在以纤维素为碳源，并加入 刚果红 的培养基上筛选周围有 透明圈 的菌落． （2）将上述筛选出的菌进行培养，则②中获得的酶是 纤维素 酶．该酶至少包括C1酶、Cx酶和 葡萄糖苷酶 三种组分． （3）③环节中被接入的常见菌种是 酵母菌 ，为了确保获得产物乙醇，④过程要注意避免污染杂菌并要注意 发酵装置密闭（保证无氧环境） ． （4）生产中为了降低酶的成本首先要通过基因工程等技术手段对产酶微生物进行改造，提高酶的产量，还可利用 固定化酶 等技术使酶能够重复利用．
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| 14. 难度：中等 | |
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饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用．若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等．以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图．请分析作答．
（1）培养基中除了添加植酸钙以外，应含有 碳源 、 氮源 、水、无机盐等基本营养物质． （2）为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行 灭菌 ，而且须将接种后的培养皿呈 倒置 状态放置． （3）接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成 单个菌落 ．根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 菌落数 就能大致推测出样品中的活菌数． （4）由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊．产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶．实验结果显示A～E五种菌株中， E 是产植酸酶的理想菌株． （5）获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行 扩大培养 ．
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| 15. 难度：中等 | |
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纤维素酶在洗涤剂、棉织品水洗抛光整理和制浆造纸等行业上有巨大的应用价值．科研人员作了如下实验，请分析回答：
（1）图1的①中接种的是造纸厂附近土壤，②培养基中的碳源应为 纤维素为唯一碳源 ⑤～⑨中分别培养的是通过 刚果红 染色鉴定法选取透明圈较大的5个菌株． （2）将这5个菌株进行发酵产生的酶，加入到纤维素溶液中，测定 还原糖含量 ，由图2可知3号菌株酶活力最高． （3）对破壁前后的酶活力进行了比较，测得未破壁的酶活力为3540U/ml，已破壁的酶活力为94U/ml．由此可知，该菌所产纤维素酶为 胞外酶 酶． （4）要测定该酪的热稳定性，应采取的实验方案是 取5只装有等量菌液的试管，置于5种不同的温度条件，培养相同时间，测定还原糖的含量，若测得还原糖含量变化不大，则说明该菌的热稳定性较好． ．
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| 16. 难度：中等 | |
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乙醇可部分替代石油燃料，利用纤维素酶、酵母菌等可将纤维素转化成乙醇，耐高温纤维素酶可以加速催化纤维素的水解，从而有利于酵母菌发酵产生乙醇． （1）某研究小组将产纤维素酶的菌株，通过诱变和高温筛选获得新菌株．为探究新菌株所产纤维素酶能否耐受80℃高温，进行了以下实验 试管1 试管2 第一步 加入适量缓冲液 加入等量纤维素酶溶液（缓冲液配制） 第二步 80℃水浴保温 30min 第三步 加入 适量纤维素液 第四步 60℃水浴保温10min 第五步 加入 斐林试剂或班氏糖定性试剂 第六步 沸水浴中加热2min，观察实验现象 结果与结论：①若 试管1内呈蓝色，试管2内有砖红色沉淀产生 ，则表明该纤维素酶能耐受80℃高温； ②若 试管1和2内均呈蓝色 ，则表明该纤维素酶不能耐受80℃高温． （2）酵母菌发酵产生的乙醇属于 次级 （填“初级”或“次级”）代谢产物．
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| 17. 难度：中等 | |
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（2012•保定一模）秸秆的主要成分是纤维素，利用秸秆粉碎液可以生产燃料乙醇．回答下列相关问题． （1）利用玉米秸秆生产乙醇首先选用 纤维素 酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖等，然后进行发酵获得乙醇，反应式是 C6H12O6 （2）具有耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，原因是 酵母菌发酵产生二氧化碳，使发酵液PH降低 ．为获取耐酸特性的酵母菌，可将野生酵母菌进行诱变，然后利用 选择 培养基筛选出突变菌． （3）利用获得的突变菌和糖汁进行酒精发酵实验，为防止外来杂菌入侵，需要对培养基 灭菌 ，对操作空间 消毒 ． （4）为了探究最佳秸秆粉碎液浓度，设置梯度实验进行探究．在实验中可利用 活菌计数 法或 显微镜直接计数 法测定酵母菌数量．
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| 18. 难度：中等 | |
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如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题：
（1）要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明 根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 ． （2）接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用 释稀涂布平板 法． （3）用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择菌落数在 30～300 间的平板进行计数．若统计出在一稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2mL，则每克样品中的菌落数为 1.5×107个 ． （4）在分离尿素分解菌所用的培养基中可加入 酚红 指示剂，根据指示剂的颜色可鉴定某种细菌能否分解尿素，若有分解尿素的细菌，培养基将会呈现 红色 ．
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| 19. 难度：中等 | |
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（2012•泰安二模）【生物一生物技术实践】 乙醇是汽油的良好替代品．利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，其主要技术流程为： ①秸秆→秸秆碎屑 （1）过程①可以加入微生物，从土壤中获取所需微生物的过程称为微生物的 分离 ．纯化菌种时，将选择培养获得的菌液稀释后用 稀释涂布平板 法接种到培养基上，并用 刚果红染色 法筛选纤维素分解菌． （2）过程①也可以加入纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括 Cx酶、C1酶和葡萄糖苷酶 三种组分．生产实践中，可采用 化学结合（或物理吸附） 法制成固定化纤维素酶，从而实现酶的重复利用． （3）酒精发酵阶段接种的微生物是 酵母菌 ，其在 无氧 条件下进行酒精发酵．接种前，对培养基进行灭菌的常用方法是 高压蒸汽灭菌 ．
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