Question

下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp^R为青霉素（抗生素）抗性基因，tct^R为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

（1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的      酶；二是将目的基因与运载体拼接的       酶；三是作为运载体的质粒。

（2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“          ”、“         ”、“         ”三种，其中有效的（所需要的）基因表达载体是         ，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。

（3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（基因表达载体）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（基因表达载体）是          。

（4）有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的       。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是              。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是              。是因为这种微生物很容易侵染到                

中，从而把它的Ti质粒上的              转移到受体细胞染色体的DNA上。

（5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是        ；作用于b位置的酶是

                  。

Answer

（1）限制酶（限制性核酸内切酶）   DNA连接酶

   （2）目的—目的基因  目的基因—运载体   运载体—运载体   目的基因—动载体

   （3）运载体—运载体和目的基因—运载体

   （4）P（启动子）   显微注射法  农杆菌转化法  双子叶植物和裸子植物  T-DNA

   （5）限制酶（限制性内切酶）   DNA解旋酶。

【解析】略