(7分)我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出,这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图,请据图回答:
(1)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多也最有效的方法是____________。重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外,还必须含有____、____、____等才能构成一个完整的基因表达载体。
(2)将所采集到的卵母细胞在体外培养到________期即可通过显微操作将其细胞核去除并形成重组细胞,然后再通过________技术培养成早期胚胎。
(3)早期胚胎的培养液成分较复杂,人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚,通常加入____等一些天然成分。
(10分))下图是利用基因工程办法生产人白细胞干扰素的基本过程图,据图回答:
(1)一般将受体大肠杆菌用____处理,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为________。
(2)②物质是从大肠杆菌分离出的____。其化学本质是____,它必须能在宿主细胞中____________。
(3)③过程表明目的基因____________。
(4)进行基因工程操作一般要经过的四个步骤是____________ 、____________、____________、____________。
(5分)已知某种传染病是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。该病毒表面的A蛋白是主要的病毒抗原,在病人康复后的血清中有抗A蛋白的特异性抗体。某研究小组为了了解这种蛋白质的结构和功能,需要更多的A蛋白作为研究材料,研究小组开展了下图所示的工作:
(1)步骤③构建重组表达载体A和B时,必须使用________酶和_______酶,后者的作用是将前者切割的A基因和____连接起来。
(2)为了检验步骤⑥所表达的A蛋白是否与病毒A蛋白有相同的免疫反应特性,可用大肠杆菌中表达的A蛋白与感染过该病毒的康复病人的血清进行________反应,从而得出结论。
(3)步骤⑥和⑦的结果相比,原核细胞表达的A蛋白与真核细胞表达的A蛋白的氨基酸序列相同吗?____。
(6分)为从根本上解决水稻中的高植酸问题,可将植酸酶基因导入水稻, 培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。据图回答:
(1)图中基因组文库____(小于/等于/大于)cDNA文库。
(2)B过程需要的酶是________;A、C过程中____(可以/不可以)使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。
(3)目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外,还可以分别利用图中____和____为模板直接进行PCR扩增,该过程中所用酶的显著特点是________。
(11分)尿素是一种重要的农业肥料,但若不经细菌的分解,就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多,同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示,实验步骤如图所示。请分析回答问题:
(1)此培养基能否用于植物组织培养?____,理由是____________。
(2)培养基中加入尿素的目的是筛选______,这种培养基属于____培养基。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的____和____,实验需要振荡培养,原因是________________。
(4)下列材料或用具:①培养细菌用的培养基与培养皿,②玻棒、试管、锥形瓶和吸管,③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是:____;需要消毒的是:____。(填序号)
(5)在进行分离分解尿素的细菌实验时,A同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有____(填序号)
①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照
(6)实验结束后,使用过的培养基应该进行____处理后,才能倒掉。
(8分)某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌,设计实验步骤如下,请给予合理的补充。
(1)采样与培养:将采集的土样混匀后称取lg,置于经过_______法灭菌处理的____(填“固体”或“液体”)培养基中,28℃振荡培养。
(2)接种与选择:为避免培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行________处理。之后,将菌液涂布接种于以____为唯一碳源的固体培养基上,30℃条件下培养。为避免污染,需将培养皿呈____状态放置。此外,为排除其他因素的影响,提高实验可信度,本步骤需设计____________作为空白对照。
(3)筛选与纯化:将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围,如果菌落周围的现象是________,则说明此种菌能够________________。