Question

（12分）为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物 （单位bp）	第二步水解	产物 （单位bp）
A酶切割	2100	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1900   200
1400	800    600
1000	1000
500	500
B酶切割	2500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1900   600
1300	800    500
1200	1000   200
经A酶和B酶同时切割	1900    1000    800    600    500    200

（1）该实验设计主要体现了__________________原则。

（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。

（3）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。

（4）已知BamH Ⅰ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamH Ⅰ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后“AGATCC//TCTAGG”和___________序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化_________键的形成。

Answer

（1）对照（单一变量）      

(2)3    2

(3)

(4)GGATCT//CCTAGA 磷酸二酯键

【解析】考查基因工程知识。

（1）此实验设计主要体现了对照原则，A酶与B酶对照。

（2）线性DNA经A酶切割后的片段共4个，所以切点有3个；经B酶切割后的片段有3个，所以切点有2个。

（3）从表格中用A酶和B酶水解后形成的片段的相邻关系，可确定产物在DNA中的分布是

，再根据A酶或B酶单独切割后形成的片段，可将A酶和B酶的切割位点找出，即

（4）BamH Ⅰ 切割后形成的黏性末端是和，  BgI Ⅱ切割后形成的黏性末端是  和AGATCC//TCTAGG是 和拼接而成，另一个重组DNA片段则是和拼接而成，即为GGATCT//CCTAGA。