(11分)．日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。获取绿色荧光蛋白基因常用的三种方法是______________________________________。
图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和________等。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有__________________等。(至少答出三项)
(15分)．下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答问题：
(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是____________________________。
(2)图甲中②过程常用的诱导因素有_____________________等（至少回答三项）。
（3）克隆羊的性别由哪只羊决定 。
(4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗?
_____________。原因是_______________________________________________。
（5）在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为哪个是最主要原因 （ ）
A．卵细胞大，便于操作 B．卵细胞含有的营养物质多
C．卵细胞的细胞质可使体细胞胞核全能性得到表达 D．重组细胞才具有全能性
（6）图甲中有两次筛选过程，第一次可以筛选出 ，第二次可筛选出 。
（7）单克隆抗体最主要的优点在于_____________________________________________。
（8）静脉注入而不是口服单克隆抗体的原因是 。
（9）单克隆抗体与肿瘤细胞结合并发挥作用的过程属于 免疫的 阶段。
（10分）．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
|
限制酶 |
BamHⅠ |
HindⅢ |
EcoRⅠ |
SmaⅠ |
|
识别序列 及切割位点 |
↓ GGATCC CCTAGG ↑ |
↓ AAGCTT TTCGAA ↑ |
↓ GAATTC CTTAAG ↑ |
↓ CCCGGG GGGCCC ↑ |
(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有____，____个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________
________________________________________________________________________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________________________________。
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。
(6)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________________________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
下列关于细胞工程的叙述，不正确的是
A．电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合
B．动物细胞传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性
C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中
D．动植物细胞培养都需要经过脱分化处理
下列关于植物组织培养技术的叙述中，正确的是
A．愈伤组织的代谢类型是自养型
B．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压
C．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因型相同
D、通过植物组织培养得到试管苗，是植物细胞具全能性的有力证据
下列有关基因工程叙述正确的是
A．基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产品质优良和具有抗性的农作物
B．检测转基因生物是否转录出mRNA，应通过DNA-DNA杂交方法
C．人胰岛素基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性
D．基因治疗主要是对有缺陷的细胞进行修复
