Question

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①～②是重组基因的合成过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶              分别对                                 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为               种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有                   作为标记基因。

（3）研究人员通常采用                    法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用　　  　　               技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

Answer

（1）PstⅠ、SmaⅠ      含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒        4、2

（2）抗氨苄青霉素基因（ampr）

（3）农杆菌转化（或基因枪法等，答案合理即给分）    抗原—抗体杂交

【解析】（1）为了防止目的基因和载体酶切后的末端任意连接，应进行双酶切，即选用限制酶PstⅠ、SmaⅠ分别对含目的基因的DNA和质粒进行切割，含目的基因的DNA切割后产生的片段有4种，质粒切割后产生的片段有2种。

（2）氨苄青霉素可用于筛选含抗氨苄青霉素基因的质粒，所以抗氨苄青霉素基因作为标记基因。

（3）将目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，或采用基因枪法或花粉管通道法，通常采用抗原－抗体杂交法检测目的基因是否翻译形成了蛋白质。