Question

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

 (1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________­­______________。

(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)

④表达出蓝色荧光蛋白

（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在                     的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到                       酶。

 (6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)   

Answer

（1）

(2)显微注射技术 (3)为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因 (4)②①③④

(5)解旋酶   Taq(耐高温的DNA聚合酶)

(6)转基因技术、核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术(至少答出三项)

【解析】（1）黏性末端是双链结构。

（2）将重组质粒导入动物细胞的方法是显微注射法。

（3）标记基因是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因。

（4）蛋白质工程的操作顺序是②①③④。

（5）细胞中将DNA双链解开选择解旋酶，DNA子链合成应选择Taq酶。

（6）转基因克隆动物应用到的技术手段有转基因技术、核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术等。