Question

基因克隆是对分离出来的目的基因进行大量扩增的过程。经过基因克隆，可以生产出大量的目的基因或在基因表达时获得大量的蛋白质。细菌质粒是基因克隆的合适载体，经研究发现，某些细菌质粒中含有两个抗生素抗性基因——氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，而且，在四环素抗性基因中存在限制酶的单一识别序列。

下图表示利用质粒进行基因克隆的过程，其中A-D表示物质，I和II表示抗性基因，①—⑦表示过程，其它数字表示菌落，据图回答下列问题：

（1）写出下列字母和编号的名称：A：         ； II：          。

（2）将A和B形成D所需的酶是        。⑤过程中为提高成功率，常用        溶液处理大肠杆菌。

（3）为筛选含有物质A的细菌，需进行细菌培养，先在培养基（一）中只加入氨苄青霉素，一段时间后，培养基上长出的细菌菌落具有        特性。然后，用灭菌绒布从培养基（一）中蘸取菌种，再按到只含四环素的培养基（二）中培养。根据培养基（一）和（二）上的细菌生长情况，可以判断图中菌落        （填数字）即为筛选出的含有物质A的细菌，原因是                                        。

Answer

（1） 目的基因      氨苄青霉素抗性基因 

（2） 限制酶和DNA连接酶    CaCl2 

（3）抗氨苄青霉素     3、5      由于目的基因破坏了四环素抗性基因，使受体细胞不能在含有四环素的培养基上生长，所以该菌落就是筛选的含有目的基因的菌落（2分）

【解析】（1）如图A表示目的基因，由于在四环素抗性基因中存在限制酶的单一识别序列，所以II表示氨苄青霉素基因。

（2）构建基因表达载体所需的酶有限制酶和DNA连接酶。为了使目的基因导入大肠杆菌，常用CaCl2处理大肠杆菌。

（3）能够在氨苄青霉素的培养基中生长的细菌菌落能够抗氨苄青霉素，由于四环素抗性基因被限制酶破坏，所以含有物质A的细菌不能在四环素的培养基上生长，即3和5。