Question

运用动物体细胞杂交技术可实现基因定位。研究发现：用人的细胞与小鼠体细胞进行杂交得到的杂种细胞含有双方的染色体。杂种细胞在持续分裂过程中仅保留鼠的染色体而人类染色体则逐渐丢失，只剩一条或几条。右图是人的缺乏 HGPRT 酶突变细胞株（ HGPRT^-）和小鼠的缺乏 TK 酶细胞株（TK^-）融合后并在 HAT 培养液中培养的过程，结果表明最终人的染色体在融合细胞中仅存有 3 号染色体或 17 号染色体或两者都有。已知只有同时具有 HGPRT 酶和 TK 酶的融合细胞才可在 HAT 培养液中长期存活与繁殖。

⑴体细胞杂交克服了     ▲     ，过程①常用的生物方法是     ▲     。

⑵过程②中，为了防止细菌的污染，所用培养液应该添加一定量的     ▲     ，此外还要定期用     ▲     处理细胞，使贴壁生长的细胞脱落形成细胞悬液。

⑶从培养过程看HAT 培养液不仅能提供养料，还起     ▲     作用。

⑷从图示结果看，可以确定人的     ▲     基因位于     ▲     号染色体；该方法可以对鼠基因定位吗？     ▲     。

Answer

⑴远缘杂交不亲和（或生殖隔离）   用灭活的（仙台／动物）病毒诱导融合   ⑵抗生素      胰蛋白酶 ⑶选择（筛选） ⑷ TK 酶  17   不能

【解析】这是利用动物细胞融合进行染色体上基因定位的应用实例。题中，选择融合的人与鼠的细胞，分别是人的缺乏 HGPRT 酶突变细胞株（ HGPRT - ）和小鼠的缺乏 TK 酶细胞株（ TK 一）。由于融合后的细胞，鼠的染色体全部保留了下来，因此融合细胞不会缺少HGPRT酶，是否缺乏TK酶，取决于人的决定TK酶基因的染色体是否在融合后会缺失。由于能够在HTA培养液中长期存在与繁殖的必须是同时含有HGPRT酶和TK酶的，如果融合细胞没有保留人细胞中决定TK酶基因的染色体，融合细胞将无法存在与繁殖；如果融合细胞获得了人细胞中决定TK酶基因的染色体，则可以在培养液中存活。从题中图示信息可知，融合细胞必须含有人细胞中的17号染色体，这说明了人的17号染色体上含有TK酶的决定基因。在这一实验过程中，HAT培养液不仅提供了融合细胞生存的条件，也起到了从混合细胞中筛选出同时含有HGPRT酶和TK酶的融合细胞的作用。