Question

（8分）下图表示血红蛋白提取和分离实验的部分装置或操作方法，请回答下列问题：

（1）如图甲，表示            过程，该操作目的是去除样品中            的杂质。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以                                 （写出一种方法）。

（2）如图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序是         （用序号表示）。在进行④操作前，应该等样品               ，且要         （填“打开”或“关闭”）下端出口。

（3）a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是       ，原因是          

Answer

（1）透析（粗分离）    分子量较小    增加缓冲液的量或及时更换缓冲液

（2）②③④①    完全进入凝胶层    关闭

⑶a a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快

【解析】分离蛋白质的流程图为样品处理，粗分离即为透析，纯化凝胶色谱，统一计划鉴定，离心血液会使血细胞和血浆中的蛋白质分开。在使蛋白质释放的过程上，除使用蒸馏水外，还应加入甲苯。提取的成为为血红蛋白，一般呈现红色；增加缓冲液的量或及时更换缓冲液快速达到理想效果，往色谱柱中加样的操作顺序为装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡，待洗脱剂流至与凝胶柱液面相平时（不能流干，否则会带入气泡），用滴管吸取样品溶液，在高于凝胶表面约1cm处，沿管壁四周缓缓滴加样品液，加完后打开下面的出口，使样品渗入凝胶内。再关闭出口，用少量洗脱液将管壁残留的样品洗下，再打开出口，至溶液渗入柱内，再关闭出口。可以考虑再加一层薄薄的脱脂棉以保护柱表面（我一般不加），然后即可进行洗脱。所以为②③④①，用凝胶色谱技术分离各种大分子物质时，大分子物质先洗脱出来，然后是小分子物质。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布于颗粒之间，所以向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔，即进入凝胶内，在向下移动的过程中，从一个凝胶颗粒内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质从而落后于大分子物质洗脱出来。在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。