Question

2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

    注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来        ，理由是：                                   。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是          。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是           。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免                        。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：            （用数字表示）。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）

④表达出蓝色荧光蛋白。

Answer

（1）可以连接       因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）

（2）显微注射技术

（3）为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因       发生免疫排斥反应

（4）②①③④

 【解析】（1）因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的），所以不同限制酶切割形成的黏性末端可以连接起来。

（2）将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法。

（3）GFP基因作为标记基因的作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因。转基因克隆猪可避免发生免疫排斥反应。

（4）蛋白质工程技术的操作顺序是②①③④。