（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
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反应条件 |
||
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温度 |
时间 |
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变 性 |
95℃ |
30s |
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复 性 |
55℃ |
30s |
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延 伸 |
72℃ |
1min |
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30个循环后 |
适宜 |
5-10min |
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保 温 |
4℃ |
2h |
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PCR反应体系 |
50ul |
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缓冲液 |
5ul |
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脱氧核苷酸 |
1ul |
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引物A |
0.5ul |
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引物B |
0.5ul |
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DNA聚合酶 |
0.5U |
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模板DNA |
1-2ul |
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加去离子水补足至50 ul |
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是 。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
（8分） 根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择性培养基和鉴别培养基，结合显微镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌分离开来。 下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容。 首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上进行培养。
(1) 用无氮培养基可筛选出 ；
(2) 用不含有机碳源的选择培养基可筛选出 ；
(3) 用加了较高浓度NaCl的选择培养基可筛选出 ， 或者根据菌落的颜色呈现 色，将其挑取单独培养；
(4)在无氧环境下培养混合菌， 和 可以生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制 微生物的生长，利用菌落特征，结合显微镜检，选取生长优势菌落，即可分离出 。
（14分）下列是有关微生物的培养与应用以及酶的应用等问题，请分析回答。
(1) 下图是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。
(2) 分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4•7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述 成分，并加入 物质，以补充 源。若用于培养纤维素分解菌，应加入 物质，为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入 染料，将呈 反应。
(3) 三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下统计结果：
甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；
乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233；
丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；
在三位同学的统计中，只有一位同学的统计是正确的，指出另两位同学的统计为什么不正确？
。
(6分)人工种植蘑菇是一项具有很高实用价值的农业技术，请结合一些具体的生产环节和一些相关问题分析回答：
(1)蘑菇培养基中要加入大量的有机质，原因是____________________________。
(2)种蘑菇所用菌种一般是亲代蘑菇产生的一些褐色粉末，每粒粉末实际上是一个______，这种生殖方式在生物界属于____________。
(3)蘑菇的细胞与细菌的细胞差别很大，主要是_____________________。
（4分）下图是患甲病（显性基因Ａ，隐性基因a）和乙病（显性基因B，隐性基因b）两种遗传的系谱图，据图回答问题：
（1）甲病致病基因位于___________染色体上，为___________性基因。
（2）从系谱图上可以看出甲病的遗传特点是____________________。若Ⅱ5与另一正常人结婚，其中子女患甲病的概率为___________。
（10分）已知血友病是由X染色体上的隐性基因(b)控制的。现有一对刚刚结婚的青年夫妇，夫妇双方都正常，但女方的弟弟是血友病患者(其父母正常)。请根据题意回答问题。
(1)据此夫妇及其家庭成员的遗传病情分析，此夫妇的基因型为：男 ；女 。
(2)医生建议这对夫妇在生育之前，应进行遗传咨询。 假如你是医生，你认为这对夫妇的后代患血友病的风险率为 ％。
（3）这对夫妇若想要一个健康的后代，最好生一个 孩。 理由是 。
