下列有关PCR技术的叙述正确的是（ ）
A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中
B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中
C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中
D.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中
下列说法正确的是 ( )
A．原生质体的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成
B．用酶解法获得原生质体后，可以用观察细胞的有丝分裂实验对其活力进行检查
C．DNA连接酶能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板
D．人的胰岛素基因可以插入到奶牛的染色体上，是因为它们的DNA都是有规则的双螺旋结构，而且DNA的基本组成单位相同
有关基因工程的叙述正确的是（ ）
A．DNA聚合酶可连接磷酸二酯键，因此可代替DNA连接酶来进行连接
B．基因运载体上的抗性基因的主要作用是提高受体细胞在自然环境中耐热性
C．运载体的作用是可以完成目的基因的转运、扩增、表达、确定在染色体上基因间的排列顺序
D．不同的限制酶能识别不同的核苷酸序列，充分体现了酶的专一性
（8分）通过植物组织培养技术，可以快速繁殖、培育无病毒的植物。据图回答问题：
（1）紫草细胞中提取的紫草素是制造治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料。若要从大量培养的紫草愈伤组织中提取紫草素，不需要经过图中②________过程，且哪项条件是不需要的__________。
A．消毒灭菌 B．适宜温度 C．充足光照 D．适宜养料和激素
（2）用植物组织培养方法诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状体结构，若包裹上人造种皮，制成人工种子，则图中的C相当于种子结构中的 ，主要作用是_____________
（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
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反应条件 |
||
|
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温度 |
时间 |
|
变 性 |
95℃ |
30s |
|
复 性 |
55℃ |
30s |
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延 伸 |
72℃ |
1min |
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30个循环后 |
适宜 |
5-10min |
|
保 温 |
4℃ |
2h |
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PCR反应体系 |
50ul |
|
缓冲液 |
5ul |
|
脱氧核苷酸 |
1ul |
|
引物A |
0.5ul |
|
引物B |
0.5ul |
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DNA聚合酶 |
0.5U |
|
模板DNA |
1-2ul |
|
加去离子水补足至50 ul |
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是 。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
（8分） 根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择性培养基和鉴别培养基，结合显微镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌分离开来。 下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容。 首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上进行培养。
(1) 用无氮培养基可筛选出 ；
(2) 用不含有机碳源的选择培养基可筛选出 ；
(3) 用加了较高浓度NaCl的选择培养基可筛选出 ， 或者根据菌落的颜色呈现 色，将其挑取单独培养；
(4)在无氧环境下培养混合菌， 和 可以生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制 微生物的生长，利用菌落特征，结合显微镜检，选取生长优势菌落，即可分离出 。
