Question

（12分）下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：

(1) 过程①使用的          酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的            （化学键）断开。运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过                            而结合。 过程②需要用到         酶，

(2图中A的名称是____________，它重组成功的物质基础是__________________ __________的结构组成相同。

(3) A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为　　　　。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取　　　　__与用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交，。

（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成            ，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和           酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。

（5）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G′GATCC—。

请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图

Answer

(1)（同一种）限制性核酸内切酶（限制酶）  磷酸二酯键   碱基互补原则  DNA连接酶 

(2)重组载体(重组质粒) 干扰素基因的DNA与细菌质粒DNA

（3）启动子   RNA   目的基因

（4）引物    DNA聚合酶（Taq酶）

（5）      —G′GATCC—               —G         GATCC—

—C  CTAGG—               —CCTAG         G—

【解析】（1）切割目的基因和质粒需用同一种限制性核酸内切酶。限制酶破坏脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，目的基因与质粒的黏性末端之间通过碱基互补配对连接起来，通过DNA连接酶构建重组质粒。

（2）由于干扰素基因的DNA与细菌质粒DNA结构组成相同，所以可构建重组质粒。

（3）驱动基因转录的结构是启动子。检测目的基因是否转录，可从细胞中提取RNA与用放射性同位素标记的目的基因作探针进行分子杂交。

（4）PCR的条件需有引物和耐高温的DNA聚合酶，即Taq酶。

（5）黏性末端是两条链。