Question

(6分)下图是动物细胞工程过程中相关的技术操作过程，请据图回答下列问题：

(1) 在操作一中，为了使细胞彼此分离，通常是先用剪刀剪碎组织，再用消化法将细胞分开，消化法用的消化酶是胰蛋白质酶，或胶原酶。研究表明胶原蛋白酶和胰蛋白酶在消化时的机制有差异，下表为两种酶活性的比较表。

项目	胰蛋白酶	胶原酶
消化特性	适用于消化软组织	适用于消化纤维多的组织
用量	0.01%～0.5%	0.1～0.3 mg/ml
消化时间	0.5～2小时	1～12小时
pH	8～9	6.5～7.0
作用强度	强烈	缓和
细胞影响	时间过长时有影响	时间长时无大影响
动物血清	有抑制作用	无抑制作用
Ca^2^＋和Mg^2^＋	有抑制作用	无抑制作用

　据表中信息可知胰蛋白质酶作用时间需限制在0.5～2小时，原因是____________________________________，为了控制胰蛋白酶的消化作用时间，常用消化临界时向溶液中直接加入________即可使酶灭活而终止消化。操作一的原理是__________________。

(2) 动物细胞培养液配制好后，通常还要先抽取少许放入培养瓶中，置于37℃、CO₂培养箱中24小时后观察，这样做的目的是__________________________。

(3) 在动物细胞培养过程中通常要对细胞进行计数，计数的细胞数应为活细胞数。某同学在细胞培养的一次测定中，首先振荡摇匀培养液并立即吸细胞悬液少数向一试管中滴入细胞悬液9滴，再滴入台盼蓝(活细胞染液)1滴，混匀。再从试管中取混合液向计数板边缘轻轻滴1～2滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖玻片之间间隙，经测定计数室每小格中活细胞数平均为3个，则原每毫升培养液中含有的活细胞数应为________个。

(4) 科研人员研究发现某一种抗原刺激机体后，在鼠体内可发现有多种效应B细胞都可产生针对于该特定抗原的抗体，这些抗体混合在一起即为多克隆抗体。试从抗原结构的角度分析产生该现象的原因是____________________________________。

Answer

 (1) 处理时间太长，细胞会被消化掉，时间太短，消化不充分(达不到细胞分散的目的) 动物血清或Ca2＋和Mg2＋ 细胞的增殖

(2) 检测培养液是否被污染

(3) 大于1.2×107

(4) 一种抗原有多种抗原决定簇

【解析】（1）若胰蛋白酶作用时间过长，则细胞会被消化掉，若时间太短，消化不充分。由表格可知，动物血清或Ca2＋和Mg2＋使胰蛋白酶失活，从而终止消化。

（2）事先观察配制好的培养液，目的是检测培养液是否被污染。

（3）根据计算公式3/（0.1/400）＝X/（1×103），求得X＝1.2×107，由于其中加入台盼蓝染液，所以X值略偏小，即原每毫升培养液中含有的活细胞数应大于1.2×107。

（4）由于一个抗原具有多个抗原决定簇，所以一种抗原会刺激产生多种效应B细胞产生多个抗体。