Question

(9分)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：

图1　转基因操作流程图

表2　几种限制酶识别序列及切割位点表

(1) 获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含____________的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入____________限制酶识别序列，这样设计的优点有利于质粒和目的基因定向连接。

(2) 过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物质，若目的基因扩增4代，则共用了引物Ⅰ________个。

(3) 请画出Pst Ⅰ切割DNA形成黏性末端的过程：__________________________。

(4) 图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____________________。

(5) 在步骤⑤⑥过程中都需用__________________________处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用____________法。

(6) 假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因。

Answer

(1) 启动子和终止子 EcoRⅠ、SmaⅠ

(2) 15

(3)

(4) 获取大量重组质粒(让目的基因扩增)

(5) Ca2＋ 抗原—抗体杂交

(6) 2

【解析】（1）由于目的基因的非编码区不转录形成mRNA，所以反转录获得的基因不含非编码区，即不含启动子和终止子。为了有利于质粒和目的基因定向连接，应选择双酶切，即选择EcoRⅠ、SmaⅠ。

（2）目的基因扩增4代，共形成16个DNA，需引物15个。

（3）黏性末端由两条链构成。

（4）将重组质粒导入大肠杆菌的目的是让目的基因扩增，获取大量重组质粒。

（5）将目的基因导入细菌的方法是用Ca2+处理，使之处于感受态，检测目的基因是否翻译出蛋白质，方法是抗原－抗体杂交法。

（6）该转基因水稻中有一个基因D，联会时DNA已复制，此时有2个D基因。