Question

基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是（    ）                        

A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割    

B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割

C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

Answer

D

【解析】一般情况下，要把目的基因连接，需要用同一种或同两种限制性内切酶酶切质粒和目的基因。在本题中，酶II的识别序列是酶I识别序列的一部分，如果质粒用酶II处理，那么在geneI和II区都会被切断，质粒变成了两段线性序列。所以质粒只能由酶I酶切。

如果目的基因用酶I处理，那么目的基因与质粒只有一段能够相连(目的基因的左边被酶I切割形成粘性末端，质粒gene I区被酶I切割成粘性末端。但是目的基因的右端不能被酶切，所以不能与质粒相连)。用酶I切割质粒后，gene II区形成两个粘性末端（GATC）；用酶II切割目的基因后，两段形成的粘性末端均为GATC。两者可以连接，形成闭合环状。