Question

（14分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有        个游离的磷酸基团。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越         。

（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是          

                                                                            。

（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止                                                     。

（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入          酶。

（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了                                   。

（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在                                         的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

Answer

（1）0、2

（2）高

（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因

（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化

（5） DNA连接

（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞

（7）蔗糖为唯一含碳营养物质

【解析】（1）质粒是环状DNA分子，一个质粒经SmaⅠ切割前后，分别含有0个或2个游离的磷酸基团。

（2）SmaⅠ酶切位点含C－G碱基对，所以SmaⅠ酶切位点越多，热稳定性越高。

（3）由于SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因，所以用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割。

（4）双酶切有利于防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。

（5）质粒片段与目的基因片段混合，需加入DNA连接酶。

（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞。

（7）该目的基因是蔗糖转运蛋白基因，所以可通过在蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养，可检测目的基因是否表达。