Question

 (12分) 下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用       限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因,筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含        的培养基上进行。

(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是　  (填字母代号)。

A．启动子       B．tet^R       C．复制原点      D．amp^R

(3)过程①采用的操作方法是         (填字母代号)。

A．农杆菌转化     B．大肠杆菌转化   C．显微注射    D．基因枪法

(4)为检测人乳铁蛋白是否表达成功，可采用        (填字母代号)技术。

A．核酸分子杂交    B．基因序列分析   C．抗原－抗体杂交    D．PCR

(5)基因工程的核心步骤是              

Answer

(（12分,每空2分) k&s%5u

(1)Hind Ⅲ和BamHⅠ 氨苄青霉素      (2)A (3)C  (4) C 

(5)构建基因表达载体

【解析】由图示可知：需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因，因酶切后tetR四环素抗性基因结构被破坏而ampR结构完好，故用含氨苄青霉素的选择培养基可筛选含有重组载体的大肠杆菌。启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶识别和结合的位点，可调控基因的特异性表达。过程①表示把重组载体导入受体细胞的过程，当受体细胞为动物细胞时，常采用显微注射法。过程②表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宫的过程，属于胚胎移植技术。)经过程②得到新个体是细胞全能性的体现。人乳铁蛋白基因是否成功表达，关键看是否有其表达产物即人乳铁蛋白，可用抗原—抗体杂交法检测该蛋白是否存在。基因工程过程的关键步骤是基因表达载体的构建。