Question

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题：

试管编号 项目	I	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸馏水(mL)	2	O	1	1	1	1
缓冲液(mL)	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果胶酶液(mL)	O	0	O	0.5	O	0
蜗牛酶液(mL)	O	0	O	O	0.5	0
纤维素酶液(mL)	0	O	0	O	0	0.5
实验结果(绿色深浅程度)	-	-	- -	+++	++++	++

（注：“+”越多表示绿色越深，“-”表示颜色无显著变化）

（1）加入酶液后要轻摇试管的目的是__________。

（2）用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用__________洗涤。

（3）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有__________等多种酶。该实验中________是空白对照组，其设置意义是______________________。

（4）收集的原生质体是否符合要求还需进行检验，如何检验？_____________。

Answer

 （12分）

（1）为了使细胞壁与酶充分接触，提高酶解效果

（2）等渗溶液    

（3）果胶酶和纤维素酶     Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ   排除无关变量的干扰  

（4）低渗涨破法

【解析】

试题分析：

（1）加入酶液后要轻摇试管的目的是为了使细胞壁与酶充分接触，提高酶解效果。

（2）用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用等渗溶液洗涤，维持细胞的形态，低浓度中原生质体吸水张破，高浓度失水皱缩。

（3）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有等果胶酶和纤维素酶多种酶。该实验中Ⅰ（）、Ⅱ（缓冲液）、Ⅲ（蒸馏水、缓冲液）是空白对照组，其设置意义是排除无关变量的干扰。

（4）收集的原生质体是否符合要求还需进行检验，采用低渗涨破法，也就是放在蒸馏水中，原生质体会吸水涨破，而植物细胞由于存在细胞壁，具有支持和保护作用，细胞不会涨破。

考点：对照实验的设计，原生质体鉴定的方法。