Question

科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC— ，限制性核酸内切酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—，据图回答：

（1）过程①所需要的酶是　　　　　。

（2）在构建基因表达载体过程中，应用限制性核酸内切酶    　切割质粒，用限制性核酸

内切酶  　 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过___________    原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是      　　　   。

（3）在过程③一般将受体大肠杆菌用_________处理，以增大　　　　　的通透性，使含有

目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

（4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果（黑点表示菌落），能够生长的细菌中已导入了            ，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是                ，这些细菌中导入了________________。

（5）图中的重组质粒的组成除了目的基因、标记基因外，还必须有       、        

Answer

（1）逆转录酶

（2）I II  碱基互补配对 人的基因与大肠杆菌DNA组成成分相同，结构相似，并都遵循碱基互补配对原则（回答出结构相似便可）

（3）CaCl2  细胞壁

（4）普通质粒或重组质粒  抗氨苄青霉素和四环素抗性 重组质粒

（5）启动子 终止子

【解析】

试题分析：（1）以mRNA为模板合成DNA的过程称为逆转录，需要逆转录酶的催化。

（2）限制酶II能够将限制酶I的识别序列切割，而限制酶I不能将限制酶II的识别序列切割，为了防止质粒被切出两个切口，应选择限制酶I切割，而目的基因两端的识别序列不同，应选择限制酶II切割；黏性末端连接的原理是碱基互补配对原则；由于人的基因与大肠杆菌DNA组成成分相同，结构相似，并都遵循碱基互补配对原则，所以人的基因能与大肠杆菌的DNA分子进行重组。

（3）将目的基因导入到细菌细胞中的方法用CaCl2处理，使其细胞壁通透性增强，便于将目的基因形成的重组DNA分子进入。

（4）在氨苄青霉素的培养基上能形成菌落的，说明导入了普通质粒或重组质粒，再在含有四环素的培养基上培养，得到如图b的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型，形成菌落提是含有抗氨苄青霉素和四环素抗性，不能形成菌落的是含有重组质粒的细菌。

考点：考查基因工程的知识。