Question

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有    、   个游离的磷酸基团。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越    。

（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是       。

（4）与只使用EcoRI相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止                。

（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入          酶。

（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了                     。

（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在                               的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

Answer

（1）0、2（2）高（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化（5）DNA连接（6）鉴定和筛选含有目的基因的细胞（7）蔗糖为唯一含碳营养物质

【解析】

试题分析：

（1）质粒分子是环状的DNA分子，没有切割之前不含游离的磷酸基团；经SmaⅠ切割前后，形成2个黏性末端，含有2个游离的磷酸基团。

（2）C和G之间含有3个氢键，A和T之间含有2个氢键，所以C和G含量越多，DNA分子热稳定性越高。SmaⅠ酶的识别序列的C和G含量较高，所以对图中质粒进行改造时，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高。

（3）因为质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因都含有SmaⅠ的切割位点，用SmaⅠ会破质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因。

（4）使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，也可以防止目的基因和质粒的反向连接。

（5）用DNA连接酶连接切割后的质粒与目的基因片段可以获取重组质粒。

（6）重组质粒中的抗生素抗性基因是标记基因，其作用是鉴定和筛选含有目的基因的细胞。

（7）丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌不能在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中生长，而导入重组质粒的丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，能在蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养，所以可以将受体细胞用以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基培养，完成目的基因表达的初步检测。

考点：本题考查基因工程的相关知识。