Question

研究表明，广泛存在于植物细胞中的原花青素有较强的抗癌作用。下面是有关的研究实验：

实验一  为研究原花青素对人类肝癌细胞的作用，将实验室培养的人肝癌细胞制成单细胞悬液，分别加入不同浓度的原花青素溶液。48小时后，检测处于细胞周期不同时期的细胞数量，得到的数据如下表。请回答问题。

（1）细胞培养箱中应含有5%的CO₂，目的是____    与细胞贴壁生长达到70%时，要用____处理后分瓶进行传代培养，这是为了避免              。

（2）癌细胞的最主要特征是____。表中数据显示，随着加入原花青素浓度的增加，    期细胞的比例逐渐增加，      期明显减少，    期减少至基本消失。表明原花青素能            。

实验二  原花青素的抗癌作用还表现在还能清除生物体内的亚硝酸盐。为了探究葡萄籽中提取的原花青素溶液清除亚硝酸盐的最适浓度，请完善以下实验设计。

实验材料：提取剂、原花青素提取液、0．4%对氨基苯磺酸溶液（显色剂1）、0．2%的N-l-萘基乙二胺盐酸盐溶液（显色剂2）、5 μg/mL的亚硝酸钠溶液、分光光度计等其他必需器材。

实验原理：①亚硝酸钠与显色剂l和2反应生成    色产物，用分光光度计测出反应后溶液的吸光度A₀。向亚硝酸钠液中加入原花青素提取液后再进行上述反应，测定吸光度A、。则亚硝酸盐的清除率可以按下式计算：清除率=（A₀—A_x）／A₀×l00%。

 ②比较        ，得出原花青素溶液清除亚硝酸盐的最适浓度。

实验步骤：

 ①取6支25ml的比色管，编号为1～6号。

 ②向l号管中加入0．5ml亚硝酸钠溶液和l0ml不含原花青紊的提取剂，再依次加入显色剂1和2，用蒸馏水稀释至刻度，静置一段时间后，用分光光度计测550nm处吸光度并记录。

③____                        。

④计算不同浓度原花青素溶液对豫硝酸盐的清除率，比较并得出结论。

Answer

实验一

（1）维持培养液的pH  胰蛋白酶  接触抑制

（2）能无限增殖  G1  S  G2/M  抑制人肝癌细胞的增殖，使其停留在G1期

实验二

实验原理：①玫瑰红  ②不同浓度的原花青素溶液对豫硝酸盐的清除率

实验步骤：③向2~6号管中加入0．5ml亚硝酸钠溶液和l0ml不同浓度的原花青紊的提取剂，其余步骤同②

【解析】

试题分析： (1)细胞培养过程中通入5%的CO2，H2O+CO2=H++HCO3-,维持培养液中的pH，与细胞贴壁生长达到70%时，要用胰蛋白酶处理后分瓶进行传代培养，这是为了避免细胞接触抑制；（2）癌细胞具有无限增殖、细胞形态结构发生显著性变化，细胞表面糖蛋白减少，黏着性降低，容易在体内分散和转移等特点，最主要特征是恶性增殖；随着加入原花青素浓度的增加，G1期细胞的比例逐渐增加，S期明显减少，G2/M期减少至基本消失。表明原花青素能抑制癌细胞增殖，使其停在G1期。①要测出不加花青素是的OA值，作为对照，然后比较不同浓度花青素溶液对亚硝酸盐作用后的OA值，计算清除效率，得出最适浓度。

考点：本题考查动物细胞培养、细胞癌变等相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，具有对一些生物学问题进行初步探究的能力。