Question

要获得遗传特性单一的枯草杆菌菌种，一般必须对原有的菌种进行扩大培养、并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答以下问题：

⑴获得纯净枯草杆菌的关键是  ，为此，必须对培养皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须  ，以防止空气中的杂菌污染。

⑵下图是纯化枯草杆菌的方法，该纯化分离方法的名称是  。

⑶枯草杆菌可以产生α-淀粉酶，以下是利用诱变育种方法培育获得产

生较多淀粉酶菌株的主要实验步骤。（原理：菌株生长过程中可释放淀

粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈。）

第一步：将枯草杆菌接种到液体培养基上进行扩大培养。

第二步：将枯草杆菌分成A、B两组，  。

第三步：制备多个含淀粉的固体培养基。

第四步：将A、B组分别稀释后，分别在含淀粉的固体培养基上利用  法分离，适宜条件下培养得到单菌落。

第五步：观察A、B组各菌落周围的    。

实验结果预期：据诱发突变率低的特点，预期  ；

据诱发突变不定向性的特点，预期  。

Answer

（1）防止外来杂菌的侵入        在酒精灯火焰旁操作

（2）平板划线法

（3）A 组用诱变剂处理，B组不处理（作对照）   稀释涂布法    透明圈大小    A组多数菌落周围的透明圈与B组差异不显著

A组有少数菌落周围的透明圈比B组明显小，有少数比B组明显大（或A组透明圈大小不一，B组较一致）

【解析】

试题分析：

⑴获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的侵入，因此必须对培养皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须在酒精灯火焰旁操作，以防止空气中的杂菌污染。

⑵由图可知，该处纯化分离枯草杆菌的方法是平板划线法。

⑶本实验的目的是利用诱变育种方法培育获得产生较多淀粉酶菌株。实验设计时要遵循对照原则和单一变量原则，所以要设计空白对照组，单一变量是诱变剂处理与否，即将枯草杆菌分成A、B两组，A 组用诱变剂处理，B组不处理（作对照）。将A、B组分别进行一系列梯度的稀释后，分别在含淀粉的固体培养基上利用稀释涂布法分离，适宜条件下培养得到单菌落。本实验的原理是：菌株生长过程中可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈。所以实验最后可以通过观察A、B组各菌落周围的透明圈大小做出判断。因为诱发突变率低，预期A组多数菌落周围的透明圈与B组差异不显著；诱发突变具有不定向性，预期A组透明圈大小不一，B组较一致。

考点：本题考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间内在联系的能力；能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用。