Question

生长因子通常是指具有刺激细胞生长的多肽类物质，主要通过与细胞膜上特异性的受体结合，来调节细胞生长及相关的功能。请根据以下提供的实验材料与用具，来研究内皮生长因子（VEGF）和胎盘生长因子（PIGF）对小鼠干细胞分化的影响，完成以下问题。

实验原理：VEGF和PIGF均能促进干细胞生长，干细胞分化后细胞内          会明显增加，可用   来判断干细胞是否分化。

实验材料：怀孕的小鼠，干细胞培养液、VEGF试剂、PIGF试剂、生理盐水、细胞培养瓶、检测试剂盒、CO₂培养箱等。

（要求与说明：答题时不考虑加入试剂后的体积变化等误差。）

实验思路：

（1）在　　　　条件下，取出小鼠胚胎的肝脏，用机械法剪碎至1mm³大小的组织块，再用适当的方法获得干细胞悬浮液。

（2）取动物细胞培养瓶，平均分成若干组，并标号，每组设置若干个重复，每个培养瓶　　　。

（3）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

（4）在　　　　　　中培养一段时间后，用试剂盒检测培养液中Akt蛋白含量，统计并分析所得数据。

预测结果：请用柱形图表示支持VEGF试剂和PIGF试剂能共同促进小鼠干细胞分化的实验结果。

Answer

实验原理：Akt蛋白含量      可用试剂盒检测Akt蛋白含量

实验思路：（1）无菌     （2）加入等量适量的干细胞培养液

（3）A组：培养液中加入适量的干细胞悬浮液；

B组：培养液中加入等量的干细胞悬浮液和VEGF试剂；

C组：培养液中加入等量的干细胞悬浮液和PIGF试剂；

D组：培养液中加入等量的干细胞悬浮液和VEGF试剂、PIGF试剂；

（4）CO2培养箱

预测结果：

【解析】

试题分析：生长因子通常是指具有刺激细胞生长的多肽类物质，主要通过与细胞膜上特异性的受体结合，来调节细胞生长及相关的功能，VEGF和PIGF均能促进干细胞生长，干细胞分化后细胞内Akt蛋白含量（多肽类物质）会明显增加，常用试剂盒检测Akt蛋白含量来判断干细胞是否分化。

细胞培养中遵循无菌原则，另外对照原则和单一变量原则也是实验设计必须遵循的，加入等量适量的干细胞培养液是排除无关变量的干扰；A组：培养液中加入适量的干细胞悬浮液，是对照组，BCD组是实验组。体外细胞培养都在CO2培养箱中完成。题中提取的是肝脏细胞属于体细胞，VEGF试剂比PIGF试剂的促进细胞生长明显，两试剂一起使用作用更明显。

考点：本题综合考查细胞分化、细胞培养和生长因子对细胞生长作用的相关知识及实验设计和分析能力，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力；具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析、处理，能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订的能力。