Question

海洋中的发光细菌具独特的生理特性，可作为环境监测的指标生物。

I.（1）使用              法（答二种），可在固体培养基上获得单菌落，纯化发光菌株。

（2）细菌这类微生物在基因工程中有重要应用，试列举其中一项。

II．现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，请完善下列实验设计并回答问题：

实验原理：细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制，抑制程度用抑光率（发光被抑制的百分率）表示。

实验材料：发光菌悬液、可能受重金属污染的待测海水水样、3%NaCl溶液、荧光分光光度计（用于测定细菌发光强度）、试管等。

（1）实验步骤：按下表配制待测海水样品稀释液。

组   别	1	2	3	4	5
3%NaCl溶（mL）		4.74	4.49	4.24	3.99
海水样品（mL）		0.25	0.50	0.75	1.00
发光菌悬液（mL）		0.01	0.01	0.01	0.01
混合液中海水浓度（%）		0.05	0.10	0.15	0.20

请完善实验步骤：

①1号试管中应加入：3％NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为           mL（3分）。

②各试管静置15min后，                                                     。

（2）计算相对抑光率：按照公式T％=                           计算各组相对抑光率。

（3）如果测得上述各组相对抑光率如下：

组别	1	2	3	4	5
相对抑光率（%）	0	6	13	17	23

①请绘制海水浓度对相对抑光率影响的曲线（3分）。

②根据结果可以判断待测海水样品                                       。

Answer

I.（1）平板划线法、稀释涂布平板法；  

（2）提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌（答对其中一项即可）。

II.（1）①4.99、0、0.01（每项1分，共3分） ②利用荧光分光光度计测定各试管发光强度

（2）（对照组发光强度－实验组发光强度）/对照组发光强度×100%

（3）①下图（3分）；②受到重金属污染

【解析】

试题分析：I.要在培养基中看到菌落，所以应是固定培养基，固体培养基的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法； 细菌在基因工程中可以提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌等；II.由2345组可知3％NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液加在一起是10ml，海水样品一每组0.25递增，发光菌悬液0.01ml不变，所以1号试管中应加入：3％NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为4.99 mL、0 mL、0.01mL；一段时间后利用荧光分光光度计测定各试管发光强度，计算其相对抑光率。1组没有加入海水样品，则其为空白对照，抑光率=（对照组发光强度－实验组发光强度）/对照组发光强度×100%，通过计算抑光率绘制曲线，发现当混合液中海水浓度为1时计算，抑光率是120%，则为重度污染。

考点：本题考查了微生物的培养、实验探究的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，具有对一些生物学问题进行初步探究、并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理的能力。