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肺细胞中的let7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用...

肺细胞中的let7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

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图1

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图2

请回答有关问题。

(1)进行过程①时,需用________酶切开载体以插入let7基因。

(2)进行过程②时,需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于传代培养。

(3)研究发现,let7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞中提取______进行分子杂交,以直接检测let7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中______(RAS  mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。

 

(1)限制性核酸内切(或限制) (2)胰蛋白 (3)RNA RAS蛋白 【解析】此题考查基因工程应用的相关知识。(1)构建基因表达载体时,需要用同种限制酶切割目的基因和载体,使之产生相同的粘性末端。(2)动物细胞培养时,常用胰蛋白酶处理贴壁的细胞,使之相互分离,以利于传代培养。(3)检验目的基因是否表达,常用分子杂交法。从被导入目的基因的细胞内提取RNA,与目的基因单链杂交,如果出现杂交带,说明目的基因已转录。由图2知,当let­7基因转录出来的miRNA与癌基因RAS转录出的mRNA杂交时,就会抑制RAS蛋白的产生,故肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中RAS蛋白含量减少引起的。  
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考点分析:
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄,使番茄的耐寒能力大大提高,可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。

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(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体,则该基因表达载体的组成通常应包括____________________等。

(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术检测目的基因是否插入番茄的基因组。

(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸,从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期,请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。

_______________________________________________________________________________

_____________________________________________________

_________________________________________________________________。

 

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下图表示从苏云金芽孢杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质基因(简称Bt基因)及形成转基因抗虫棉的图解。请据图回答下面的问题。

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(1)图中a过程要用到的酶是_______________________________________。

(2)在进行图中b过程时,由我国科学家独创的十分简便经济的方法是________,此外,也经常采用________法。若要培育转基因绵羊,则此过程要用________的方法。

(3)为确定抗虫棉是否培育成功,既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交测试,又要在个体水平上鉴定,后者具体过程是_________________________________________________________________。

(4)活化的毒性物质应是一种________分子,可以全部或部分嵌合于昆虫的细胞膜上,使细胞膜产生孔道,导致细胞由于渗透平衡的破坏而破裂。

(5)我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究,可以减少农药、杀虫剂的使用。这将对________起到重要作用。

 

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下列技术依据DNA分子杂交原理的是(    )。

①观察DNA在细胞中的分布  ②检测目的基因是否导入细胞  ③检测目的基因是否翻译  ④检测目的基因是否进行转录

A.②③    B.①③      C.②④    D.①④

 

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现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子,用限制性核酸内切酶EcoRⅠ单独酶切后得到的DNA分子仍是1000  bp,用Kpn  Ⅰ单独酶切得到400  bp和600  bp两种长度的DNA分子,用EcoR  Ⅰ、Kpn  Ⅰ同时酶切后得到200  bp和600  bp两种长度的DNA分子,该DNA分子的酶切图谱(如图所示)正确的是(    )。

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在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中,下列操作错误的是(    )。

A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸

B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体

C.将重组DNA分子导入烟草原生质体

D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞

 

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