近十年来,PCR技术(聚合酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段,其原理是利用DNA半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如图),在很短的时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)加热使DNA双链打开,这一步是打开________键,称为________。
(2)当温度降低时,引物与模板________端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,此过程中原料是________,遵循的原则是________。
(3)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件,即:液体环境、适宜的________和________,前者由PCR仪自动调控,后者则靠________来维持。
在进行DNA亲子鉴定时,需大量的DNA。PCR技术(聚合酶链式反应)可以使样品DNA扩增,获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如下图,图中黑色长方形是引物)。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)图中的变性、延伸分别是指________、________。
(2)假设PCR反应中的DNA模板为P,第一轮循环的产物2个子代DNA为N1,第二轮的产物4个子代DNA为N2,N1、N2中分别含有模板DNA单链的DNA分别有____个、____个。若继续循环,该DNA片段共经过30次循环后能形成____个DNA片段。
(3)若下图为第一轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。
PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是( )。
A.反复洗涤 B.用酒精擦洗
C.高压灭菌 D.在-20 ℃储存
PCR仪实质上是一台自动调控温度的仪器,它调控不同温度的目的是 ( )。
①95 ℃,使DNA分子变性,失去生物活性 ②95 ℃,使DNA分子变性,解开螺旋 ③55 ℃,使DNA分子开始复制、延伸 ④55 ℃,使DNA分子恢复双螺旋结构,恢复活性 ⑤72 ℃,使DNA分子开始复制、延伸 ⑥72 ℃,使DNA分子恢复双螺旋结构,恢复活性
A.①③⑤ B.②③⑤
C.②④⑤ D.②④⑥
PCR一般要经过三十多次循环,从第二轮循环开始,上一次循环的产物也作为模板参与反应,由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时 ( )。
A.仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸
B.与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸
C.同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸
D.无需与引物结合,在酶的作用下从头合成子链
引物的作用是 ( )。
A.打开DNA双链
B.催化合成DNA子链
C.使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制
D.提供模板