Question

肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图一请回答有关问题。

⑴进行过程①时，需用________酶切开载体并用_____________酶连接以插入let7基因。

（2）重组载体的基本组成成分包括_________ ________ ________ _________

(3)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(4)研究发现，let7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图二。据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_____含量减少引起的。

Answer

（1）限制性核酸内切（或限制） DNA连接酶

（2）目的基因、启动子、终止子、标记基因

（3）胰蛋白

（4）RNA RAS蛋白

【解析】

试题分析：

（1）构建基因表达载体时，需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使之产生相同的粘性末端；用DNA连接酶可以将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来。

（2）基因表达载体由目的基因、启动子、终止子、标记基因等四部分组成。

（3）动物细胞培养时，常用胰蛋白酶处理贴壁的细胞，使之相互分离，以利于传代培养。

（4）检验目的基因是否表达，常用分子杂交法。从被导入目的基因的细胞内提取RNA，与目的基因单链杂交，如果出现杂交带，说明目的基因已转录；由图2知，当let­7基因转录出来的miRNA与癌基因RAS转录出的mRNA杂交时，就会抑制RAS蛋白的产生，故肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中RAS蛋白含量减少引起的。

考点：本题考查基因工程的有关知识，意在考查考生识图能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。