Question

(15分)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。请回答下列问题。

(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用________法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________；使用________法可以在⑥上获得单菌落。

采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？ ______________________。

(3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？__________________________。

(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染？__________________________。

Answer

(1)苯酚 A 稀释平板计数(或活菌计数或菌落计数)

(2)④含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚为唯一碳源 平板分离(或稀释涂布平板或平板划线分离) 避免培养过程产生的水分影响微生物的生长

(3)用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，通过测定接种了不同菌株的培养液中的pH来测定培养液中苯酚含量

(4)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作

【解析】考查微生物的分离、培养、数量测定、无菌操作等基本技术。(1)依题意可知，研究人员要从土壤中筛选获得只能利用苯酚的细菌菌株，苯酚应是这些细菌的碳源，所以培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源；苯酚作为唯一碳源，它的浓度将影响培养基中细菌的数量；稀释平板计数(活菌计数或菌落计数)法是常用来统计样品中活菌数目的方法。(2)从题图中可以看出，微生物在④中不生长，而在⑤中能够生长，说明④中缺乏微生物生长的必要条件，因为本实验是为了筛选能降解苯酚的细菌菌株，因此可推断④含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚为唯一碳源；若在⑥上获得单菌落，最常用的方法是平板分离(稀释涂布平板或平板划线分离)；采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上影响微生物的生长。(3)苯酚显酸性，不同菌株降解苯酚的能力不同，故用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，测定接种了不同菌株的培养液中的pH，则能比较不同菌株降解苯酚能力的大小。(4)实验过程中，从制备培养基到接种与培养等全部实验过程都要无菌操作，如培养器皿及培养基的灭菌，接种环境灭菌，接种过程要注意无菌操作等。