Question

（12分）科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图，请回答相关问题：

（1）过程①获得重组胚胎之前需要通过__________________技术获得重组细胞，接受细胞核的去核卵母细胞应该处于___________________时期。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其_______________分离出ES细胞。步骤③中，需要构建含有干扰素基因的__________________。构建之前可以利用_____________________技术对目的基因进行扩增。

（3）将基因导入ES细胞常用的方法是________________________。体外诱导ES细胞向不同方向分化是利用了ES细胞的_________________。

（4）为检测干扰素基因的表达情况，可采用__________________方法，若有杂交带出现，表明目的基因已成功表达。

Answer

（1）核移植 MⅡ

（2）内细胞团 （基因）表达载体 PCR

（3）显微注射 全能性

（4）抗原一抗体杂交

【解析】

试题分析：

（1）把上皮细胞导入去核的卵母细胞的过程为细胞核移植，可以得到重组细胞，通过培养获得重组胚胎；去核的卵母细胞必须培养到减数第二次分裂中期才用于核移植。

（2）过程②为早期胚胎培养，在囊胚期的内细胞团细胞即为胚胎干细胞；步骤③为导入外源基因，构建基因表达载体后才能导入受体细胞；构建基因表达载体之前可以用PCR技术进行扩增。

（3）将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法；ES细胞可以诱导向不同的方向分化，利用的ES的全能性的特点。

（4）目的基因在受体细胞内通过转录和翻译合成了相应的蛋白质，说明了目的基因已经成功表达，而检测蛋白质的方法是抗原—抗体杂交，如果出现杂交带，说明了目的基因已经完成了表达。

考点：本题考查细胞工程、基因工程的有关知识，意在考查考生识图能力、识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。