据图所示，有关工具酶功能的叙述不正确的是（ ）
A．限制性内切酶可以切断a处 B．DNA聚合酶可以连接a处
C．解旋酶可以使b处解开 D．DNA连接酶可以连接c处
在基因表达载体的构建中，下列说法正确的是（ ）
①一个表达载体的组成包括目的基因、标记基因、启动子、终止子
②有了启动子才能驱动基因转录出mRNA
③所有基因表达载体的构建是完全相同的
④终止子的作用是使转录在所需要的地方停止．
A．②③ B．①②④ C．①②③ D．②③④
下列关于现代生物技术的叙述中不正确的是（ ）
A.植物细胞去除细胞壁获得的原生质体仍然具有全能性
B.动物细胞培养过程中需用胰蛋白酶处理获取单个细胞
C.需使用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞
D.DNA连接酶将DNA分子碱基对之间的氢键连接起来
下列有关基因工程的叙述，正确的是
A．目的基因经土壤农杆菌导入植物受体细胞后，整合到受体细胞染色体上，因此一定能稳定遗传
B．DNA连接酶的作用是将两个粘性末端的碱基连接起来
C．基因表达载体的构建是基因工程的核心，其上的启动子部位具有RNA聚合酶的结合位点
D．常用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等
分析下列遗传规律问题。（20分）
（1）拉布拉多犬的毛色由两对位于常染色体上且独立遗传的等位基因E、e和F、 f控制，不存在显性基因F则为黄色，其余情况为黑色或棕色。一对亲本生下四只基因型分别为EEFF、Eeff、EEff和eeFF的小犬，则这对亲本的基因型是 ；这对亲本若再生下两只小犬，其毛色都为黄色的概率是 。若基因型为Eeff的精原细胞通过有丝分裂产生了一个基因型为Eff的子细胞，则同时产生的另一个子细胞基因型是 （不考虑基因突变）。
自交不亲和性指某一植物的雌雄两性机能正常，但不能进行自花传粉或同一品系内异花传粉的现象，如某品种烟草为二倍体雌雄同株植物，却无法自交产生后代。请回答：
（2）烟草的自交不亲和性是由位于一对同源染色体上的复等位基因(S1、S2……S15)控制，（S1、S2……S15）互称为 ，它们的出现是 的结果，同时也体现了该变异具有 特点。
（3）烟草的花粉只有通过花粉管（花粉管由花粉萌发产生）输送到卵细胞所在处，才能完成受精。图为不亲和基因的作用规律：据此图判断在自然条件下，烟草不存在S系列基因的 个体，结合示意图说出理由 。将基因型为S1S2的花粉授于基因型为S2S3的烟草，则全部子代的基因型种类及比例为 。
（4）研究发现，S基因控制合成S核酸酶和S蛋白因子的两个部分，前者在雌蕊中表达，后者在花粉管中表达，导致雌蕊和花粉管中所含的 等分子有所不同。传粉后，雌蕊产生的S核酸酶进入花粉管中，与对应的S因子特异性结合，进而将花粉管中的rRNA降解，据此分析花粉管不能伸长的直接原因是 。
1917年，摩尔根发现了一只缺刻翅雌果蝇，让它与正常翅雄果蝇交配，后代中雄果蝇均为缺刻翅，雌果蝇均为正常翅。请回答：
（5）摩尔根杂交实验表明，缺刻翅基因位于 染色体上。亲本中，缺刻翅雌蝇和正常翅雄蝇的基因型分别是 （显、隐性基因分别用N、n表示）。
同年，布里奇斯发现了另一只缺刻翅红眼雌果蝇，且该果蝇细胞学检查发现染色体异常（如图所示），研究表明这种染色体异常纯合（雄性果蝇有一条异常的染色体，即视为纯合体）会导致果蝇死亡。深入研究发现，因缺刻翅基因不能正确编码Notch受体而影响翅的发育。已知果蝇红眼（基因B）对白眼（基因b）为显性，眼色和控制翅形的基因都位于图中染色体的II区。
（6）从图中看出，布里奇斯发现的缺刻翅红眼雌果蝇可能是图中 （甲/乙）染色体发生 所致，该果蝇的基因型为 。
（7）布里奇斯用该红眼缺刻翅雌蝇与白眼正常翅雄蝇杂交，子代中的缺刻翅个体占 ，雌蝇和雄蝇的比例为 。F2中雄果蝇个体占 。（2分）
（13分）回答下列有关基因工程问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是 。
图所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。
酶M特异性剪切的DNA片段是
，则酶N特异性剪切的DNA片段是 。
多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有 种。
图的A和B分别表示两段DNA序列。表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。
（3）据图：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图A所示，则应选择表格中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图A和B所示，则应选择表中酶__________进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图B所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）
图甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成某种酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（5）将处理后的目的基因EPSPS与pUC18质粒、DNA连接酶混合后，再与某菌种混合，若要从混合物中筛选出含EPSPS基因的菌株，在图三十二乙的培养基中必须加入 。请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种颜色菌落会含有重组质粒___________。
（6）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因是 。
