Question

（12分）大肠杆菌是人和动物肠道中普遍存在的一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，大肠杆菌通过发酵能将葡萄糖转变为多种有机酸并产生CO₂等气体。某研究机构使用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。请回答：

（1）研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化为         ，并且在倒置的小管中出现        。

（2）测定大肠杆菌活菌数目时，需制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，该培养基中为细菌提供氮源的物质是   。为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入           作为指示剂。

（3）为了便于统计污染严重的水体中活菌的数目，需将水样进行适当稀释，例如取水样1mL加入无菌水        mL制备稀释倍数为10²的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。每个稀释们数的菌液取10mL进行过滤，然后将滤膜放置在培养基上。为了防止杂菌污染，稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在          附近进行。

（4）将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养，每隔12h统计一次菌落数目，应选取菌落数目  时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为10²的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，那么每升河水中约含大砀杆菌       个。用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要少，这是因为         。

Answer

（1）由蓝变绿再变黄 气泡 （2）牛肉膏和蛋白胨 伊红美兰 （3）9 酒精灯火焰

（4）稳定 4.5x105 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落

【解析】

试题分析：（1）大肠杆菌细胞呼吸产生的二氧化碳气体可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。

（2）牛肉膏蛋白胨固体培养基中为细菌提供氨源的物质是牛肉膏和蛋白胨。为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红美兰作为指示剂，观察是否出现深紫色并伴有金属光泽的菌落。

（3）对水样进行适当稀释时，取水样1mL加入无菌水9mL可制备稀释倍数为102的稀释液。为了防止杂菌污染，稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在酒精灯火焰附近的无菌区进行。

（4）将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养，每隔12h统计一次菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为102的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，那么每升河水中约含大砀杆菌（43+47+42+48）/4/102/1000= 4.5x105个。由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，所以用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要少。

考点：本题考查微生物培养及计数的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。