Question

（8分）下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是      、      。

（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到      酶。如果是两两重组，可能有      种长度的重组结果，。

（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用      酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和       kb，或者      kb和      kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

Answer

（1）缺少标记基因 复制原点被限制酶切割（2）限制酶（PvuⅠ）和DNA连接酶 3

（3）EcoRⅠ 5.6 3.1 3.6

【解析】

试题分析：（1）由图可知质粒A上没有任何标记基因，所以不能用作运载体。质粒C上有标记基因，目的基因和运载体都需要用PvuI酶切割，而其复制原点会被限制酶切割掉，所以不能用作运载体。

（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到限制性核酸内切酶即Pvu I连接时需用DNA连接酶。如果是两两重组可能会用质粒-质粒、目的基因-目的基因、质粒-目的基因3种组合方式。

（3）由题意可知重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计，而目的基因中只有EcoR I 酶切位点，所以应用该酶进行酶切。质粒总长是2.7kb，EcoR I和Pvu I之间是0.1kb，故应是1+0.1=1.1,3+26=5.6。目的基因也有可能反向连接也可能会出现3+0.1=3.1,1+2.6=3.6kb。

考点：本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握和对图形分析能力。