Question

[生物——选修1：生物技术实践]（15分）

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用于        染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用        （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以        为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用        直接计数；若要测定其活菌数量，可选用        法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，       ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕        ℃设计后续实验。

Answer

（1）苏丹III（或者苏丹IV） 萃取法

油脂

血细胞计数板 稀释涂布平板

45 40

【解析】（1）油脂可被苏丹III染液（或苏丹IV）染液染成橘黄色（或红色）。由于微生物A产生的油脂不易挥发，故采用萃取法。（2）脂肪酶的微生物B可以分解脂肪，故可以以脂肪为碳源的固体培养基进行培养，不产生脂肪酶的微生物无法生存。（3）微生物B的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；活菌用稀释涂布平板法，只有活的菌体才能形成菌落。（4）45℃降解10g油脂所需酶量最大，故酶活性最小；40℃温度下，降解10g油脂所需酶量最小，故酶活性最大，由此可知要想探究该酶的最适温度需要围绕40℃温度设置温度梯度进行实验。

【考点定位】本题考查了油脂的提取和鉴定、微生物的分离、菌体计数、及温度对酶活性的影响等知识点。