作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由是:
A．能在宿主细胞中稳定保存并大量复制，以便提供大量的目的基因
B．具有多个限制酶切
点，以便于目的基因的表达
C．具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合
D．对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：
(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。
(2)步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
请回答下列有关胚胎工程和生态工程的相关问题：
（1）雌性排卵时，减数第一次分裂尚未完成，此时卵子处于 卵母细胞阶段。当该细胞发育至减数第二次分裂 期时，才具备受精能力。若在卵细胞膜和透明带之间看到两个极体，则表明 过程已发生。
（2）若某对夫妇结婚后发现妻子双侧输卵管堵塞，无奈需进行试管婴儿技术，该技术
括____________和____________。
（3）2015年3月，柴静的纪录片《穹顶之下》引发全国人民对雾霾的关注和讨论，而山西作为产煤大省，生态环境破坏严重，请问矿区废弃地的生态恢复工程的关键在于____________，具体措施有_________________，（举例说明，任答两种）利用了的生态工程原理是_________________。
某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如图所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。 回答下列问题：
(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过________次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是________小鼠，理由是______________。
(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_________________________________，体系中出现多种类型细胞的原因是_______________________________。
(3)杂交瘤细胞中有________个细胞核，染色体数目最多是________条。
(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是__________________。
α1-抗胰蛋白缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该致病患者常可采用注射人α1-抗胰蛋白酶来缓解症状。
（1）图1表示获取人α1-抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：
①a过程是在 酶的作用下完成的，该酶的作用特点是 。
②c过程称为 ，该过程需要的原料是 。
③要确定获得的基因是否是所需的目的基因，可以从分子水平上利用 技术检测该基因的碱基序列。
（2）利用转基因技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更易获得这种酶，简要过程如图2。
①获得目的基因后，常利用 技术在体外将其大量扩增。
②载体上绿色荧光蛋白（GEP）基因的作用是便于 。基因表达载体d，除图中的标示部分外，还必须含有 。
③若要使转基因羊的后代均保持其特有的性状，理论上应选用 技术进行繁殖。
下列属于克隆的是 ( )
①将表达载体在受体细胞中进行扩增
②由一个细胞经过有丝分裂形成细胞群
③运用体细胞核移植技术和胚胎分割技术产生的动物
④由一个细菌分裂出多个和它完全一样的细菌而形成菌落
A．①②③ B．①③④
C．②③④ D．①②③④
