Question

I一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(己知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。

(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取I mL样液至盛有9 mL无菌水的试管中，照此依次稀释10³稀释度。各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55， 56， 57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为＿＿。

(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是＿＿＿＿。

(3)获得纯净培养物的关键是_＿＿＿＿。在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步＿＿＿＿。

(4)在培养基上形成的菌落中，无透明圈菌落利用的氮源主要是＿＿＿＿。实验结果如图显示的A～E五种菌株中，＿＿是最理想菌株。

II回答下列有关生物技术的问题:

(1)胡萝卜组织培养的MS培养基与微生物培养基的主要区别是:①＿＿＿＿＿＿＿＿＿，②前者一般还含有植物激素。

(2)从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是＿＿＿＿＿＿。对胡萝卜进行粉碎、干燥时，要特别注意干燥的＿＿＿和时间，以防止胡萝卜焦糊。提取后宜采用＿＿＿方式进行鉴定。

Answer

I

（1）5.6×108

（2）在无氮培养基中添加该除草剂

（3）防止外来杂菌的入侵 稀释获得单个菌落

（4）氮气 E

II

（1）前者含大量无机营养成分，后者以有机营养成分为主

（2）萃取法 温度 纸层析法

【解析】

试题分析：I

（1）图中稀释的倍数是103，三个菌落的平均数=（55+56+57）÷3=56，则每毫升样品中菌株数=56÷1×103=5.6×104个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6÷0.1×104×103=5.6×108个。

（2）该除草剂为含氮有机物，为了选育能降解该除草剂的细菌，应采用唯一氮源的选择培养基，即无氮的固体培养基中添加该除草剂。

（3）接种技术的核心是无菌操作，防止杂菌污染，保证培养物的纯度。在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，培养时只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长，原因是培养基缺少这些细菌可利用的氮源。

（4）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，菌落利用的氮源就只能是空气中的氮气了；而出现透明带说明除草剂被分解，菌落是分解该除草剂的细菌，氮源是该除草剂；E透明圈最大，故是最理想菌株。

II（1）胡萝卜组织培养的MS培养基与微生物培养基的主要区别是:①前者含大量无机营养成分，后者以有机营养成分为主，②前者一般还含有植物激素。

（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是萃取法。对胡萝卜进行粉碎、干燥时，要特别注意干燥的温度和时间，以防止胡萝卜焦糊。提取后宜采用纸层析法方式进行鉴定。

考点：本题考查微生物的培养及植物有效成分的提取。