Question

（14分）科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的 分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性核酸内切酶II的识别序列和切点是一 ↓GATC—，据图回答：

（1）在构建基因表达载体过程中，应分别用限制性核酸内切酶_________、_________切割质粒、目的基因。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，其结构基础是______。

（2）在过程③一般将受体大肠杆菌用_________处理，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

（3）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果（黑点表示菌落），能够生长的细菌中已导入了________，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是________。这些细菌中导入了_________。

Answer

（14分）

（1）Ⅰ（2分） Ⅱ（2分） 人的基因与大肠杆菌DNA螺旋结构相同（2分）

（2）CaCl2（2分）

（3）普通质粒或重组质粒（2分） 能抗氨苄青霉素不能抗四环素（2分） 重组质粒（2分）

【解析】

试题分析：（1）在构建基因表达载体过程中，应分别用限制性核酸内切酶Ⅰ和Ⅱ切割质粒、目的基因，以保证质粒上形成缺口，目的基因能够从原始DNA中分离出来。不同生物的DNA之所以能进行重组，是因为两者的DNA结构完全相同，均为规则的双螺旋结构。

（2）过程③为目的基因导入微生物细胞的过程，通常先用CaCl2等溶液处理大肠杆菌，使其转化为感受态细胞，便于吸收外源DNA，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

（3）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如图a的结果，细菌如果能够生长，说明其体内含有氨苄青霉素抗性基因，已经成功导入普通质粒或重组质粒。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是能抗氨苄青霉素不能抗四环素，原先质粒的中四环素抗性基因被破坏，说明这些细菌中导入了重组质粒。

考点：本题考查基因工程的操作及原理、微生物的培养及选择等知识。