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为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,...

为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,导人油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

1研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用____________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因从拟南芥基因文库中获取转运肽基因所含三种限制酶ClaI、SacI、XbaI的切点如下图所示。则用___________和_____________酶处理两个基因后,可得到____________填图中字母端相连的融合基因。

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2将上述融合基因插入右上图所示质粒的T-DNA中。构建____________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落,再利用培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液。

3剪取油菜的叶片放入染液中一段时间后筛选获得转获因油菜细胞。该细胞通过____________技术,可培育成转基因油菜植株。

4提取上述转基因油菜的mRNA在逆转录酶的作用下获得cDNA,再依据______的DNA片段设计引物进行扩增对扩增结果进行检侧,可判断融合基因是否完成_____。

 

(1)PCR(聚合酶链式反应/多聚酶链式反应) ClaⅠ DNA连接 A、D (2)基因表达载体(重组质粒/表达载体) 四环素 (3)植物组织培养 (4)融合基因 转录 【解析】 试题分析:(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时,分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列,这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后,得到A、D端相连的融合基因。(2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中,构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中.将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落,再利用液体培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液。(3)剪取油菜的叶片放入染液中一段时间后筛选获得转获因油菜细胞。该细胞通过植物组织培养技术,可培育成转基因油菜植株。(4)提取上述转基因油菜的mRNA.在逆转录酶的作用下获得cDNA,再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增.对扩增结果进行检侧,可判断融合基因是否完成转录。 考点:本题以增加油菜种子的含油量为材料背景,考查基因工程、植物组织培养的相关知识,意在考查学生的识图能力和判断能力,运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力。  
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考点分析:
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科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统,在检测目的基因导入成功后,删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因。其技术过程如下图中的■代表基因前的启动子,据图回答:

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1loxP是一种只有34个碱基对构成的小型DNA片段,是有两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列共同组成,自身不会表达,插入质粒后也不影响原有基因的表达,其碱基序列如下:

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Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP,其功能类似于基因工程中的________酶。从遗传学角度分析,Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的________。

2作为标记基因,抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原因是______。

3经检测成功后,抗除草剂基因已没有用途,继续留在植物体内可能会造成的安全问题是________。经Cre酶处理后,质粒中的两个loxP序列分别被切开后,可得到如上图右侧的这两个DNA分子。由于___________的原因,抗除草剂基因不再表达,之后会在培养过程中消失。

4loxP序列是有方向性的。如果经Cre酶处理后,发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上,则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是________。

A两个都是正向           B两个都是反向

C一个正向一个反向       D与方向无关

 

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绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒TMV基因,可以合成一种抗TMV蛋白,叶片对TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物,由于TMV的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草,主要流程如下图所示。

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1科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA,然后合成目的基因。图中过程表示____________。

2由图分析,在过程构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是_______基因,重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是______________。

3在过程培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外,还必须添加_________,以保证受体细胞能培养成再生植株。

4过程可采取______________的方法,检测植株是否合成了抗TMV蛋白。在个体水平的鉴定过程中,可通过______________的方法来确定植株是否具有抗性。

 

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科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞iPS,继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠。流程如下:

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1从黑鼠体内获得体细胞后,对其进行的初次培养称为_______。培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂,这种现象称为_______。

2图中2满分5 manfen5.com细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得,该过程称为_____;也可从灰鼠体内取出卵子,通过______后进行早期胚胎培养获得。

3小鼠胚胎干细胞ES可由囊胚的______分离培养获得。iPS与ES细胞同样具有发育全能性,有望在对人类iPS细胞进行定向______后用于疾病的细胞治疗。

 

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1植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的_________,繁殖种苗的速度________。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养,最终能够形成完整的植株,说明该叶肉细胞具有该植物的全部____________。

2微型繁殖过程中,适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗____,而与________配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长,促使愈伤组织产生和生长,需要使用的生长调节剂是_________脱落酸、2,4—D

 

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小麦植株进行光合作用和呼吸作用的最适温度分别为25和30。如图甲表示小麦绿色植物的光合作用与细胞呼吸两者之间的关系;图乙表示在一定CO2浓度、环境温度为25、不同光照强度条件下测得的小麦叶片的光合作用强度以CO2吸收量表示。请回答下列问题:

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1图甲中X物质表示________;能产生Z物质的过程有________写标号过程中发生的能量变化是________。

2图乙中C点时,该植物的总光合速率为________mg/100cm2叶·小时用CO2吸收量表示。C点以后限制光合作用强度继续上升的环境因素是_____。依此原理,在农业生产中可采用__________具体措施提高小麦产量。

3请在图乙中用虚线绘出环境温度为30时,光合作用强度随光照强度变化的曲线。

 

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