Question

人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图：

（1）过程①代表的是____________。

（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用限制性核酸内切酶和____________两种工具酶。由过程③构建A基因重组载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、_________以及复制原点等。

（3）过程④要检测A基因是否进入受体细胞，常用的方法是________________法；要检测A基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，需用________________法。

（4）与血清抗体相比，单克隆抗体突出的优点是______________，并能大量制备。

（5）单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的_____________和____________两大技术。

（6）单克隆抗体的制备过程中，两次筛选的目的不同，其中第二次筛选的目的是筛选出______。筛选时所用的培养基是特定的_______________培养基。

（7）举例说出基因工程培育转基因植物的过程中，微生物能起到的重要作用有         、          。

Answer

（1）逆转录

（2）DNA连接酶 标记基因

（3）DNA分子杂交 抗原抗体杂交

（4）特异性强、灵敏度高

（5）动物细胞融合 动物细胞培养

（6）能产生所需抗体的杂交瘤细胞 选择性

（7）工具酶的主要来源 提供目的基因 提供运载体 基因文库中的受体细胞（选填二项，其他合理答案也可））

【解析】（1）由RNA得到DNA的过程是逆转录。

（2）构建重组质粒需要限制性内切酶将目的基因和运载体切开，用DNA连接酶将目的基因和运载体相连接，故还需要DNA连接酶。运载体上除了有启动子、终止子目的基因外还需要有标记基因。

（3）检测基因是否导入受体细胞用DNA分子杂交，如果出现杂交带说明有该目的基因。检测是否表达需要抗原-抗体杂交，出现杂交带说明表达成功。

（4）单克隆抗体特异强、灵敏度高并可大量制备。

（5）单克隆抗体制备过程中运用到了动物细胞融合和动物细胞培养，应用的是骨髓瘤细胞和B细胞的融合。

（6）单克隆抗体的制备过程中至少需要两次筛选，第一次是筛选杂交瘤细胞，用选择培养基进行筛选，第二次是筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。

（7）微生物在基因工程中可以是工具酶的主要来源，因为限制性核酸内切酶主要从原核生物中提取。可以作为运载体，常见的质粒、动植物病毒。还可以提供目的基因或者是作为基因文库中的受体细胞。

【考点定位】本题考查现代生物技术相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。

【名师点睛】总结：单克隆抗体制备过程中的两次筛选

第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞。

第二次筛选：利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。

易错警示 植物体细胞杂交与动物细胞融合的3个易错点

（1）植物体细胞杂交与动物细胞融合中酶的作用对象不同，纤维素酶和果胶酶作用于细胞壁，而胰蛋白酶等作用于细胞间的蛋白质。

（2）灭活的病毒保持了其抗原性，但毒性消失。

（3）植物杂交细胞在激素诱导下能表达出全能性，但动物杂交细胞的全能性不能表达。