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下面是将乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产...

下面是将乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料,请分析回答下列问题。

资料1:巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源,同时AOX1基因醇氧化酶基因受到诱导而表达,5'AOX1和3'AOXlTT是基因AOX1的启动子和终止子,此启动子也能使外源基因高效表达。

资料2:巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,下图为科学家改造的pPIC9K质粒,其与目的基因形成的重组质粒在特定部位酶切后形成的重组DNA片段可以整合到酵母菌染色体上,最终实现目的基因的表达。

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1如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上_________限制酶识别序列SnaB I、Avr II、SacI、Bgl II四种限制酶的识别序列均不相同,这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。

2酶切获取HBsA9基因后,需用______________将其连接到pPIC9K质粒上,形成重组质粒,根据步骤可知步骤将重组质粒先导入大肠杆菌的目的是______________

3步骤3中应选用限制酶______________来切割从大肠杆菌分离的重组质粒从而获得图中所示的重组DNA片段,然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。

4为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功,在培养基中应该加入______________以便筛选。

5转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入______________以维持其生活,同时诱导HBsA9基因表达。

6与大肠杆菌等细菌相比,用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行_______并分泌到细胞外,便于提取。

7培育转化酵母细胞所利用的遗传学原理是______________

 

(1)SnaBⅠ AvrⅡ (2)DNA连接酶 大量重组质粒 (3)BglⅡ (4)DNA分子杂交 (5)甲醇 (6)加工(修饰) (7)基因重组 【解析】(1)重组质粒上的目的基因若要表达,需要目的基因的首尾含有启动子和终止子.而SnaBⅠ、AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间,只要在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列,并用SnaBⅠ、AvrⅡ这两种内切酶对质粒和目的基因同时切割,便会各自出现相同的粘性末端,便于重组与表达,同时防止自身环化,因此在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列。 (2)①用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒;②导入大肠杆菌体内,目的是利用大肠杆菌无性繁殖速度,短时间内可获取大量的重组质粒。 (3)重组DNA的两侧分别是启动子和终止子,除BglⅡ外,其它限制酶会破坏含有启动子、终止子的目的基因。 (4)用DNA分子杂交技术检测是否导入目的基因。 (5)资料1显示,甲醇为该酵母菌的唯一碳源,同时诱导HBsAg基因表达。 (6)酵母菌为真核生物,细胞内具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体等细胞器,细菌等原核生物,不具有内质网和高尔基体等细胞器。 (7)培育转化酵母细胞所利用的遗传学原理是基因重组。 【考点定位】基因工程的应用  
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B图中病毒的主要成分是蛋白质和DNA

C病毒是最基本的生命系统

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