Question

[生物——选修1：生物技术实践]

某实验小组以洋葱组织为实验材料，进行DNA粗提取和鉴定的实验，实验主要过程如下图，回答下列问题：

（1）步骤一中需加入一定量的洗涤剂和    对洋葱组织进行处理，加入前者是为了瓦解细胞膜结构，加入后者的目的是____。将搅拌和研磨后的物质进行过滤，即可得到含有DNA的滤液。

（2）步骤二是DNA纯化过程中的关键步骤，可以采用以下几种不同的方法：

①滤液中NaCl浓度在0．14 mol／L时可分离出DNA，若要再次提纯，需要将其溶解在mol／L的NaCl溶液中；

②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，其目的是____；

③将得到的DNA粗提取物放在60～75℃水浴中保温10～15 min，蛋白质被破坏，但仍能得到纯度较高的DNA，说明了DNA             ．

（3）步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是___      _，依据的原理是          。得到纯净的DNA后，可利用DNA与             在沸水浴条件下发生显色反应，来对其进行鉴定。

Answer

（1）食盐（氯化钠） 溶解DNA

（2）①2

②破坏其中的蛋白质

③具有较高的稳定性（或耐较高温度）

（3）析出DNA DNA不溶于酒精，但酒精可以使蛋白质变性并与DNA分离 二苯胺

【解析】（1）步骤一为破碎细胞，需加入一定量的洗涤剂和食盐处理洋葱组织，加入洗涤剂的目的是为了瓦解细胞膜结构，加入食盐的目的是为了溶解DNA。

（2）②向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，可以破坏其中的蛋白质；

③高温中蛋白质被破坏，但仍能得到纯度较高的DNA，说明DNA具有较高的稳定性．

（3）DNA不溶于酒精，但酒精可以使蛋白质变性并与DNA分离，实验中用体积分数为95%的酒精可以析出DNA DNA，获得纯净的DNA。

【考点定位】DNA粗提取和鉴定的实验

【名师点睛】知识点拨：

1、蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。

2、洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶。

3、如果研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

4、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

5、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。

6、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

7、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。

8、DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系：

当NaCl溶液浓度低于0．14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCl溶液浓度高于0．14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。

9、盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。

鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。

10、本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。可选用鸡血细胞作材料。

11、实验中两次使用蒸馏水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次日的是稀释 NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。