Question

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：

（1）为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿         。右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是           。

（2）在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同      一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

（3）用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你可以用         办法来估计培养基的此温度。

（4）取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0．1%        水溶液中进行表面消毒5min，再用       将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序是依次是        。（用编号表示）。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是                           。

（5）下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配置的培养基配方，请指出其中的明显不足之处          。

K2HP04	FeS04	MgS04．7H20	NaNO3	KCl	蔗糖	木糖	琼脂	蒸馏水
0．1g	0．001g	0．05g	0．3g	0．05g	3．0g	3．0g	2．og	100ml

（6）再将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏           能力的酿酒酵母作为受体菌。

（7）将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能           ，即说明所需菌株培育成功。

Answer

（1）用牛皮纸包扎 安全阀、排气阀（2分）

（2）称量纸（2分）

（3）用手触摸盛有培养基的锥形瓶刚刚不烫手（2分）

（4）氯化汞 无菌水 ①-③-② 涂布不均匀

（5）应该以木糖为唯一碳源

（6）尿嘧啶合成能力

（7）既能利用木糖，又能耐受酒精（2分）

【解析】

试题分析：

（1）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程。微生物实验用的器皿常用干热灭菌法，将器皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎，以避免灭菌后的再次污染。图1中的甲是安全阀，乙是排气阀。

（2）在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热。

（3）用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶刚刚不烫手的办法来估计培养基的此温度。

（4）取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0．1%氯化汞水溶液中进行表面消毒5min，再用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。在培养基上接种时划线的顺序是每一区的划线应从前一区划线的末端位置开始划线，从而能将菌种逐区减少；分析图甲培养基上菌种的分布可知，①③②区菌落数越来越少，所以划线操作的顺序是①③②。图乙显示：培养后菌落分布不均匀，其原因可能是接种时涂布不均匀造成的。

（5）欲筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌，所配置的培养基配方中应该以木糖为唯一碳源。表格信息显示：该同学所配置的培养基配方中有蔗糖和木糖两种碳原，所以该培养基配方的明显不足之处是：应该以木糖为唯一碳源。

（6）已知将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌，其目的是利用质粒标记基因表达的性状来判断目的基因是否成功导入受体细胞，所以应该选择缺乏尿嘧啶合成能力的酿酒酵母作为受体菌。

（7）转基因酿酒酵母能利用葡萄糖和木糖进行发酵且对酒精耐受能力强，所以应将该转基因酵母菌接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，表明它既能利用木糖，又能耐受酒精，说明菌株培育成功。

考点：本题考查微生物的培养与应用、基因工程的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。