Question

（2015春•景洪市校级期中）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有    和    ．

（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是          ．

（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即     DNA连接酶和    DNA连接酶．

（4）反转录作用的模板是         ，产物是      ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用    技术．

（5）基因工程中除质粒外，   和    也可作为运载体．

（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是                ．

Answer

（1）黏性末端 平末端

（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同

（3）大肠杆菌 T4

（4）mRNA（或RNA） cDNA（或DNA） PCR

（5）噬菌体 动植物病毒

（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

【考点】基因工程的原理及技术．

【分析】基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种．DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶．基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．

【解析】【解析】
（1）经限制性核酸内切酶切割后能形成两种类型的末端，即平末端和黏性末端．

（2）为了便于相连，两种不同限制酶切割之后所产生的黏性末端必须相同．

（3）DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶．这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低．

（4）反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用PCR技术进行大量扩增．

（5）基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．

（6）当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca2+处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒．未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱．

故答案为：

（1）黏性末端 平末端

（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同

（3）大肠杆菌 T4

（4）mRNA（或RNA） cDNA（或DNA） PCR

（5）噬菌体 动植物病毒

（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

【点评】本题考查基因工程的相关知识，重点考查基因工程的工具，只要考生识记基因工程三种工具的相关知识即可，属于考纲识记层次的考查，这需要考生在平行的学习过程中构建相关知识网络结构．