Question

GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

（1）完成图中A过程必需的工具是              ；该基因治疗的受体细胞为         。

（2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的           限制酶进行酶切。

（3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是             。

（4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是_______（多选）。

A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同

C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

（5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为       个，反向连接的重组载体产生片段有       （多选）。

①100bp  ②200bp  ③600bp   ④700bp  ⑤6000bp  ⑥6500bp

Answer

（1）限制酶和DNA连接酶 神经干细胞

（2）XhoⅠ

（3）A

（4）ADB

（5）2 ②⑥

【解析】

试题分析：（1）A过为运载体与目的基因连接，需要限制酶切割和DNA连接酶连接。运载体将目的基因导入到大鼠神经干细胞中，因此神经干细胞是受体细胞。

（2）质粒上有XhoⅠ识别位点，而且在启动子之后，所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切。

（3）B图没有标记基因，不利于鉴定，而CD图又破坏了标记基因，也不利于鉴定，故选A。

（4）限制性核酸内切酶具有专一性，只能识别特定的核苷酸序列，A错误；RNA聚合酶的作用是催化转录形成RNA，能形成RNA上的磷酸二酯键，而限制酶是作用于DNA上的磷酸二酯键，B错误；使用质粒运载体是为了将目的基因导入受体细胞，避免目的基因被分解，C正确；质粒运载体一般来自于细菌或真菌，不是噬菌体DNA改造的，D错误。

（5）泳道①仅有一种条带，属于载体自连；泳道②有两种条带，且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同，为正向连接，有2个切点，产生的酶切片段数为2个；泳道③有两种条带，长度与BamHⅠ酶切后结果相同，为反向连接，切割后的长度为200bp和6500bp。

考点：本题考查基因工程、动物细胞培养的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤等，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项。