Question

【现代生物科技专题】人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。

（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。

（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

Answer

（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）； DNA分子杂交（或核酸探针）

（2）超数排卵； 获能（处理）

（3）显微注射法； 性别鉴定； 全能性

（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）（1分）

【解析】

（1）目的基因和载体都必须用同种限制性核酸内切酶切割，产生相同的黏性末端然后用DNA连接酶进行连接构建基因表达载体。要检测目的基因是否插入到受体细胞中可以用DNA分子杂交进行检测，如果出现杂交带说明已经导入。

（2）要获得更多的卵细胞可以用促性腺激素进行超数排卵，获得更多的卵细胞。采集的精子需要经过获能处理后才具有受精能力。

（3）将表达载体导入到受精卵中动物用显微注射法，植物用农杆菌转化法，微生物用氯化钙处理法。因此应是显微注射法。要获得更多的母羊应对胚胎进行性别鉴定，选择为雌性的进行胚胎移植。用胚胎分割和胚胎移植可以获得多个转基因个体，能发育成个体说明了早期胚胎具有全能性。

（4）如果在转基因母羊总检查到了人组织纤溶酶原激活物，说明基因表达成功，可以用抗原-抗体杂交进行检测。

【考点定位】本题考查基因工程和胚胎工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记和理解掌握程度。

【名师点睛】易错警示 （1）获得精子和卵子后，两者并不立即在体外结合：需要对精子进行获能处理，并将卵母细胞培养成熟至减数第二次分裂中期。

（2）胚胎发育的过程中，细胞的全能性并非完全相同，桑椹胚具有全能性，囊胚是开始分化的阶段，原肠胚时期已出现高度分化。