Question

回答有关基因工程的问题

嗜热土壤芽胞杆菌产生的β﹣葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验．

（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是      技术．

如图为质粒限制酶酶切图谱．下表为限制酶的酶切位点．

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	NdeⅠ
识别序列及切割位点	G↓GATCC	A↓AGCTT	G↓AATTC	CA↓TATG

（2）如图的质粒上有多个酶切位点，本实验中没有选择XbaI酶切割质粒，原因是      ．

（3）分析如图，可选择两种不同的限制酶      和      切割质粒，以防止质粒自身环化．质粒被切割后，可用      将其与目的基因连接．在动物基因工程中将目的基因导入受体细胞时通常的方法是      ．

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为      ．

Answer

（1）PCR扩增

（2）由于Xbal在质粒不止一个酶切位点

（3）NdeⅠBamHⅠDNA连接酶

（4）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶

【解析】

试题分析：基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．

限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．

目的基因应插入启动子和终止子之间

【解析】
（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是PCR扩增技术．

（2）根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应导入启动子和终止子之间．图中看出，两者之间存在于三种限制酶切点，但是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点，因此本实验中没有选择XbaI酶切割质粒．

（3）分析如图，以防止质粒自身环化，扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列，在用DNA连接酶将其与目的基因和质粒连接成重组质粒．如果受体细胞是动物细胞，常用显微注射技术将目的基因导入受体细胞．

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶．

故答案为：（1）PCR扩增

（2）由于Xbal在质粒不止一个酶切位点

（3）NdeⅠBamHⅠDNA连接酶

（4）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶

考点：基因工程的原理及技术．