Question

羊奶中乳白蛋白含量很低，科研人员尝试利用转基因技术将人乳白蛋白基因导入羊胚胎的成纤维细胞核，进而培育转基因克隆山羊。技术流程如下图，据图回答：

（1）图中①过程中使用的酶有           。

（2）图中②过程使用的方法是       。将导入成功的细胞核注入到③         构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中④     技术可培育成转基因克隆山羊。

（3）与预期结果相反，转基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低。为探究其原因，研究人员从     细胞中提取总RNA，然后以                    作为探针进行分子杂交，结果发现没有出现杂交带。

（4）研究人员对上述现象的解释：可能由于人乳白蛋白基因      （首端、尾端）无启动子，从而不能进行转录。推测要使该基因在山羊乳腺细胞中表达，须将它与             等调控组件重组起来，构建基因表达载体。

Answer

（1）限制酶、DNA连接酶

（2）显微注射技术 去核卵母细胞（必须体现出无核） 胚胎移植

（3）（转基因克隆山羊）乳腺 同位素标记的含有人乳白蛋白基因的DNA片段

（4）首端 山羊乳腺蛋白基因的启动子

【解析】

试题分析：（1）图中①过程为构建基因表达载体的过程，其中使用的酶有限制酶、DNA连接酶。

（2）图中②过程表示将构建的基因表达载体导入受体细胞（胎儿的成纤维细胞），常采用显微注射技术。构建重组细胞，需将成功导入人乳白蛋白基因的细胞核注入到去核的卵母细胞中。由重组细胞培养成的早期胚胎，需经胚胎移植技术才能培育成转基因克隆山羊。

（3）为探究转基因克隆山羊的乳汁中乳白蛋白含量依然很低的原因，可从（转基因克隆山羊）乳腺细胞中提取总RNA，然后以同位素标记的含有人乳白蛋白基因的DNA片段作为探针进行分子杂交。

（4）若进行分子杂交的结果没有出现杂交带，可能的原因是：人乳白蛋白基因首端无启动子，从而不能进行转录。要使该基因在山羊乳腺细胞中表达，须将它与山羊乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组起来，构建基因表达载体。

考点：本题考查基因工程、细胞工程、胚胎工程的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。